春剑(Cymbidium tortisepalum var.longibracteatum)是兰科(Orchidaceae),兰属(Cymbidium)植物中最美丽、最具欣赏价值的类群之一,且因其具有稀有性,上世纪80年代至今,春剑野生种质资源遭受了难以恢复的破坏。解决春剑规模化快速繁殖问题,对春剑遗传资源保护和产业化栽培具有重要意义。本研究以春剑成熟蒴果通过无菌萌发形成的根状茎为材料,探究了春剑根状茎增殖、分化、植株再生的影响因素和条件。同时从组织细胞学水平,探究了春剑中间繁殖体的起源与发育。其主要研究结果如下:1、基本培养基、植物外源激素、天然添加物、切割方式及培养方式在春剑根状茎增殖过程中有重要影响,最适培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+香蕉汁3%,以液-固交替培养方式增重率最高。2、继代时间、基本培养基、培养方式、植物外源激素及活性炭(AC)影响春剑根状茎向不定芽的分化,诱导春剑根状茎不定芽形成的最佳培养基配方为花宝一号+NAA0.8 mg/L+6-BA1.2mg/L。不添加AC时,前期芽的分化较迅速,但后期会因褐化而抑制芽的继续生长。3、基本培养基、植物外源激素及AC在春剑植株再生过程中起重要作用。其中NAA对春剑不定芽生根至关重要,最佳用量为1.8mg/L,最佳培养基配方为花宝一号+AC3g/L+6-BA0.1mg/L+NAA1.8mg/L;培养30D后,幼苗平均根长在2-3cm,苗高可达5cm以上。4、组织培养过程中,春剑根状茎的细胞学结构特征同根类似,由表皮、皮层和中柱三层结构组成。根状茎培养过程产生的侧生细胞突起,主要有三个方向的继续发育途径:一是不进行细胞分化,长出侧生分枝后继续营养生长;二是形成分生组织,直接分化成芽;三是发生更深层次细胞分化,形成类原球茎及愈伤组织。芽的形成过程建立在原套-原体学说的基础上。叶原座和叶原基在形态学上端交替出现,最终形成带状叶。春剑不定根的产生是通过激发结构内部特定细胞进行平周分裂,产生的根原始体细胞进一步伸长形成根原基,根原基再向表皮扩张和突破,最终形成完整的不定根。