马铃薯StGRAS基因家族鉴定与StGAI基因克隆及其遗传转化

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:y286491357
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GRAS蛋白是一类高等植物所特有的转录因子,其在植物茎的伸长、根的形态发育、种子的休眠、花的发育、光响应途径以及激素调控方面都有广泛的参与。目前对GRAS转录因子只在模式植物拟南芥中进行了深入的研究。在玉米、水稻、番茄、松树和葡萄几个物种中都鉴定出了GRAS基因家族以及对单个基因的功能进行了初步验证。本试验以马铃薯栽培种“费乌瑞它”为试验材料,通过生物信息学的方法在马铃薯中鉴定了StGRAS转录因子家族,通过实时荧光定量(qRT-PCR)技术分析了部分家族基因在不同组织中的表达量和不同激素诱导下的表达量;利用PCR技术克隆了一个与赤霉素信号通路相关的基因StGAI基因,构建过表达载体和干扰表达载体进行农杆菌介导的马铃薯遗传转化。研究结果如下:1.利用生物信息学的方法在马铃薯栽培种“费乌瑞它”中鉴定了52个马铃薯StGRAS转录因子,并分析发现马铃薯StGRAS基因大部分含有一个外显子,几乎90%的基因为单外显子基因,所有基因分布在12条染色体上。StGRAS蛋白一般由300800个氨基酸组成,利用进化树分析发现52个马铃薯StGRAS基因可以分为八个亚家族。2.利用PCR技术从马铃薯中克隆到了StGAI基因,该基因属于StGRAS基因家族的DELLA亚家族。基因全长2293 bp,位于11号染色体上,其CDS区长1767bp,编码588个氨基酸残基。3.将PCR克隆到的马铃薯StGAI基因与植物表达载体pBI121,构建了过表达载体。通过WMD3在线网站设计人工miRNA干扰表达载体前体引物,利用重叠PCR技术获得人工miRNA前体片段。构建了干扰表达载体。利用农杆菌介导的遗传转化获得过表达和干扰表达转基因植株。4.利用GA3对非转基因植株和转基因植株进行处理利用qRT-PCR分析发现两者之中马铃薯StGAI基因在048 h内表达量呈上升趋势。分析发现过表达转基因植株中StGAI基因的表达量在各个时间段均高于非转基因,干扰表达转基因植株StGAI基因表达量均低于非转基因植株。
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