溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)是炎症性肠病(inflammatorybowel disease, IBD)的一种，其发病机制尚不明了。目前认为肠黏膜免疫异常、持续肠道感染、遗传和环境等因素均参与了该病的发生发展，其中免疫调控失衡是UC的重要致病因素。CD4+T细胞是免疫系统中最重要的效能细胞，包括辅助性T细胞(T helper cell, Th cell)和调节性T细胞(Tregulatory T cell, Treg)，在调控体内免疫应答和维持免疫平衡中发挥重要作用。CD4+T细胞过度增殖、分化导致促炎与抗炎免疫失衡是UC的主要特点之一。近年来的研究表明，转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)和白细胞介素(interleukin, IL)-4联合可诱导CD4+初始T细胞分化成一群大量分泌IL-9的新T细胞亚群，活化的Th2细胞在TGF-β单独存在的情况下也可以产生相同的结果。因其主要分泌细胞因子IL-9，且诱导分化途径又不同于T细胞的其他亚群，所以被命名为Th9(CD4+IL-9+)细胞。Th9细胞参与了自身免疫性脑脊髓膜炎、结核性胸膜炎、过敏性皮炎等多种炎性疾病的炎症进展，给重组活化基因1缺陷(recombination-activating gene1-deficient, RAG-1)小鼠回输Th9细胞亦可成功诱导小鼠结肠炎症。肿瘤坏死因子样配体1A(tumor necrosis factor-like ligand1aberrance,TL1A)是肿瘤坏死因子超家族成员15(TNF superfamily member15,TNFSF15)基因的蛋白产物，主要表达在人类的内皮细胞，包括人脐静脉内皮细胞、成人皮肤微血管内皮细胞和子宫肌层内皮细胞等。目前研究表明，TL1A是IBD的易感基因，可通过与死亡受体3(death receptor, DR3)结合，激活Th1、Th2和Th17细胞，致肠黏膜免疫紊乱，引发IBD的肠道炎症反应。然而目前TL1A对Th9细胞的影响尚不清楚。本研究主要是通过检测TL1A转基因小鼠及WT小鼠结肠组织中Th9细胞水平探讨TL1A对Th9细胞活化的影响。目的：探讨TL1A对慢性实验性结肠炎小鼠结肠组织中Th9细胞活化的影响。方法：①本实验以淋巴细胞过表达TL1A的转基因小鼠及WT小鼠为研究对象，采用RT-PCR方法进行TL1A的转基因(LCK-CD2-TL1A-GFP,L-Tg)小鼠的鉴定与筛选；②12只具有相同遗传背景的C57BL/6WT小鼠(体重15~18g，6~8周龄)随机分为Control/WT组、DSS/WT组，每组6只；12只L-Tg小鼠(体重15~18g，6~8周龄)随机分为Control/Tg组、DSS/Tg组，每组6只。Control组饮用蒸馏水，DSS组间断饮用3%右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)，时间段分别为第1~5天、第8~12天、第15~19天、第22~26天及第27、28天，其余时间饮用蒸馏水，第29天处死动物；③每日观察小鼠的精神状态、体重、活动情况、毛发光泽度、粪便形状、大便潜血情况等，进行疾病活动指数(disease activityindex, DAI)评分，评估结肠炎症程度；④观察结肠形态学改变，记录结肠长度变化，进行大体评分；⑤应用苏木素伊红(Hematoxylin and eosin, H&E)染色观察结肠组织病理学改变并评分；⑥测定结肠组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)含量；⑦分离肠黏膜固有层单个核细胞(laminapropria mononuclear cells, LPMC)并计数，应用流式细胞术(Flow cytometry,FC)检测Th9(CD4+IL9+T)细胞占CD4+T细胞比例。结果：①体重改变：Control/WT组与Control/Tg组小鼠体重增加，分别为42.06%±6.41%和35.26%±2.70%；DSS/WT组小鼠体重虽亦有增加，但增加幅度显著低于Control/WT组(9.28%±5.70%vs42.06%±6.41%,P<0.05)；DSS/Tg组小鼠体重较原始体重降低，显著低于Control/Tg组(-9.66%±2.50%vs35.26%±1.56%, P<0.05)，并且显著低于DSS/WT组(-9.66%±2.50%vs9.28%±5.70%, P<0.05)。②DAI评分：Control/WT组和Control/Tg组小鼠DAI评分均为(0.00±0.00)，两组比较无统计学差异；DSS/WT组与DSS/Tg组小鼠的DAI评分逐渐升高，且DSS/Tg组显著高于DSS/WT组(2.55±0.90vs1.58±0.70, P<0.05)。③结肠长度、大体形态学及病理学评分：Control/WT组与Control/Tg组结肠形态正常，H＆E染色未见粘膜破损、炎症细胞浸润及溃疡形成，而DSS/WT组与Control/WT组相比，结肠长度显著缩短(6.38±0.47vs7.63±0.54, P<0.05)，形态学评分显著增高(1.60±0.31vs0.00±0.00, P<0.05)，病理见黏膜上皮缺损、大量炎症细胞浸润、浅溃疡生成，病理评分也显著高于Control/WT组(9.50±0.79vs0.00±0.00, P<0.05)；DSS/Tg组小鼠的结肠长度显著短于DSS/WT组(5.30±0.18vs6.38±0.47, P<0.05)，结肠形态学评分及病理评分也显著高于DSS/WT组，分别为(2.80±0.64vs1.60±0.31, P<0.05)和(11.85±0.86vs9.50±0.79, P<0.05)。④MPO活性检测：DSS/WT组的MPO活性显著高于Control/WT组(1.48±0.40vs0.65±0.26, P<0.05)；DSS/Tg组的MPO活性显著高于Control/Tg组(2.20±0.45vs0.93±0.25U/g, P<0.05)；DSS/Tg组高于DSS/WT组(2.20±0.45vs1.48±0.40, P>0.05)，差异无统计学意义。⑤分离、计数LPMC，应用流式细胞术检测LPMC中Th9细胞占CD4+T细胞比例：DSS/WT组的LPMC数显著高于Control/WT组(2.65×106±0.32×106vs1.68×106±0.15×106, P<0.05)；DSS/Tg组的LPMC数显著高于Control/Tg组(3.70×106±0.28×106vs1.72×106±0.17×106, P<0.05)和DSS/WT组(3.70×106±0.28×106vs2.65×106±0.32×106, P<0.05)。结肠组织LPMC中Th9细胞占CD4+T细胞比例：Control/WT组为0.10%±0.02%，Control/Tg组为0.12%±0.01%。DSS/WT组显著高于Control/WT组(0.23%±0.03%vs0.10%±0.02%, P<0.05)；DSS/Tg组显著高于Control/Tg组(0.54%±0.04%vs0.12%±0.01%, P<0.05)和DSS/WT组(0.54%±0.04%vs0.23%±0.03%,P<0.05)。结论：TL1A可能通过促进Th9细胞活化加重结肠粘膜炎症。