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目的:本研究旨在通过密度梯度离心法、流式细胞术和体外细胞培养的方法,探索小鼠肺组织内造血干细胞(hematopoietic sterm cell,HSC)分离、纯化与诱导分化为树突状细胞(dendriric cell,DC)的方法,为肺组织内造血干细胞进一步研究奠定基础并且为树突状细胞的诱导分化提供一种新的实验路径。方法:1、将24只C57健康雄性小鼠随机分为6组,每组4只,肺组织来源的细胞为实验组,同时采集外周血,其来源的细胞为对照组。肺组织经I型胶原酶和I型DNA酶消化制成单细胞悬液。实验组和对照组分别经淋巴细胞分离液,分离纯化为肺单个核细胞。2、瑞氏吉姆萨染色后倒置相差显微镜观察实验组和对照组单个核细胞的形态。3、流式细胞仪鉴定、分选Lin~-Sca-1~+c-Kit~+细胞(LSK)及造血干细胞。4、向所获得的HSC加入SCF和IL-3促进细胞增殖并计数,停用SCF和IL-3后,加入粒GM-CSF和IL-4诱导分化为DC,加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)促细胞成熟。5、倒置显微镜观察细胞生长情况,记录生长变化,扫描电镜观察细胞外形。6、流式细胞术(FACS)分析DC表面特异性分子CD80、CD86、CD11c和MHC-II的表达水平。7、酶联免疫吸附技术(ELISA)检测培养液上清中IL-12分泌水平。结果:1、瑞氏吉姆萨染色后显微镜观察外周血单个核细胞和肺单个核细胞没有明显区别:细胞散在分布,体积偏小,圆形或类圆形,细胞核大居中或偏位,核仁不明显,胞质较少。2、流式细胞仪鉴定、分选实验组共收集HSC 2419.67±247.59个,纯度7.16±0.43%;对照组未收集到HSC。3、体外培养分离纯化的HSC,经SCF和IL-3诱导7天后细胞扩增62.34±3.23倍;停用SCF和IL-3后,加入GM-CSF、IL-4和LPS诱导培养15天后获得成熟的树突状细胞,倒置显微镜和扫面电镜观察细胞,细胞表面具有典型的树枝状突起,流式细胞仪鉴定细胞高表达树突状细胞特异性表面分子CD11c92.62±3.68%,MHCⅡ(75.96±5.13)%,CD80(72.07±4.38)%和CD86(83.89±6.28)%。4、酶联免疫吸附技术(ELISA)检测细胞上清液中IL-12的表达水平136.12±16.59。结论:肺组织内存在造血干细胞,其具有较好的干细胞增殖分化特性,可经细胞因子增殖诱导向具有免疫功能的树突状细胞分化。