顺铂预处理对细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤非霍奇金淋巴瘤细胞株的影响

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目的:顺铂(DDP)是治疗实体肿瘤及非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkin lymphoma, NHL)的常用化疗药,常作为二线药物治疗复发、难治性非霍奇金淋巴瘤,但治疗过程中会出现许多不良反应,且效果欠佳。随着细胞免疫学及分子生物学的发展,化疗联合免疫治疗已应用于临床。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells, CIK)具有可大量增殖、对多种肿瘤细胞杀伤活性强大、非MHC限制性、对自身组织无细胞毒作用等优点。研究表明小剂量顺铂(DDP)对实体肿瘤细胞进行预处理后,既可减少其不良反应,又可增强CIK细胞的杀伤活性。本实验旨在探讨顺铂预处理对细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤非霍奇金淋巴瘤细胞株的影响。方法:体外培养人类NHL细胞株Namalwa (Burkitt淋巴瘤细胞株)、SU-DHL-4(弥漫大B淋巴瘤细胞株),取对数期细胞进行实验。用Ficoll密度梯度离心法获得外周血单个核细胞(PBMC),第一日加入γ干扰素(Interferon-γ, IFN-y)1000u/ml,置于37℃,5%CO2,饱和湿度条件下培养24小时,然后分别加入重组人白介素-1(Interleukin-1, IL-1)100u/ml.重组人白介素-2(Interleukin-2, IL-2)500u/ml、抗CD3单克隆抗体50ng/ml,在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中进行培养。以后每3天半量更换新鲜培养液,并补加重组人白介素-2500u/ml。采用CFSE/PI双标法检测DDP预处理不同浓度(Ong/ml、25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml的DDP)、不同时间(预处理18小时、24小时、36小时),CIK对非霍奇金淋巴瘤细胞的杀伤活性影响并比较。结果:获得体外诱导21天时的CIK细胞,CD3+CD56+及CD3+CD8+的细胞比例理想,可作为效应细胞。向靶细胞中分别加入4种浓度DDP预处理,随着DDP预处理浓度的增加,CIK细胞杀伤淋巴瘤细胞株的活性随之增强,加入CIK细胞前后两组相比,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。DDP预处理靶细胞后继续培养,取3段不同培养时间的细胞加入CIK细胞并进行检测,随着DDP预处理时间的延长,CIK细胞杀伤淋巴瘤细胞株的活性亦增强,加入CIK细胞前后两组相比,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:顺铂(DDP)预处理淋巴瘤细胞株后,CIK杀伤淋巴瘤细胞株的活性增强,DDP与免疫治疗具有协同抗肿瘤作用。
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