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第一部分柚皮素延缓糖尿病肾病大鼠肾损伤的研究目的探讨柚皮素对糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏保护作用。方法采用高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法建立DN大鼠模型。将DN模型大鼠随机分为DN组和柚皮素(Naringenin,NAR)组,按50 mg/kg剂量治疗6周。检测大鼠24h尿蛋白定量、肌酐清除率、肾脏指数;HE染色观察肾组织形态学和检测肾小球面积;Real time RT PCR法检测Ⅳ型胶原(type 4 collagen,Col4)和纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)m RNA的表达;Western blot和免疫荧光检测Col4和FN蛋白的表达。结果成功建立了DN大鼠模型。DN组大鼠较正常组大鼠24h尿蛋白显著升高,肌酐清除率明显下降,肾脏指数明显增大,肾小球呈肥大状态,同时Col4和FN的m RNA水平和蛋白表达量均升高;经柚皮素治疗后的DN大鼠的24h尿蛋白明显降低,肌酐清除率升高,肾脏指数降低,肾小球肥大减轻,同时肾脏组织中Col4和FN的m RNA水平和蛋白表达量明显降低。结论柚皮素通过调控糖尿病肾病大鼠肾组织中细胞外基质蛋白的合成,减轻肾脏病理损害,从而起到保护肾脏的作用。第二部分柚皮素对高糖条件下系膜细胞增殖的调控作用目的探讨柚皮素对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的调控作用。方法MTT法检测不同浓度、不同时间下柚皮素对系膜细胞生长的影响;流式细胞术检测柚皮素对细胞周期的影响;Western blot和免疫荧光检测细胞外基质相关蛋白Col4和FN表达水平。结果柚皮素抑制系膜细胞增殖的作用呈时间和剂量依赖性,并使系膜细胞生长停滞于G2期,同时柚皮素抑制系膜细胞合成细胞外基质。结论柚皮素抑制肾小球系膜细胞增殖与合成细胞外基质。第三部分柚皮素通过靶向let-7a/TGFBR1信号途径延缓糖尿病肾损伤目的探讨柚皮素延缓糖尿病肾损伤的作用机制。方法Real time RT PCR检测micro RNA let-7a在糖尿病肾病大鼠和小鼠肾小球系膜细胞中的表达;双荧光素酶报告系统和Western blot检验TGFBR1是否为let-7a的靶基因;Western blot检测柚皮素和let-7a分别作用以及共同作用对细胞外基质相关蛋白和TGF-β1/smad信号途径相关蛋白表达水平的影响。结果let-7a在糖尿病肾病大鼠血液和组织以及高糖培养的小鼠系膜细胞中呈低表达状态,经柚皮素作用后let-7a表达上调;验证了TGFBR1是let-7a的一个靶基因;在组织和细胞中TGF-β1、TGFBR1和磷酸化smad2蛋白的表达量均升高,TGF-β1/smad信号途径抑制因子smad7蛋白表达量降低,经柚皮素治疗后,TGF-β1、TGFBR1和磷酸化smad2蛋白的表达量均降低,smad7蛋白表达量升高;同时,柚皮素通过上调let-7a抑制TGFBR1和磷酸化smad2的表达以及抑制Col4和FN蛋白合成。结论TGFBR1是let-7a的靶基因,柚皮素通过靶向作用于let-7a/TGFBR1信号通路抑制细胞外基质的产生,从而达到延缓糖尿病肾损伤的作用。