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椰心叶甲Brontispa longissima（Gestro）是棕榈科植物主要害虫之一,属鞘翅目Coleoptera,铁甲科Hispidae。其取食和产卵导致棕榈科植物严重经济损失。本文筛选了对椰心叶甲致病力较强的绿僵菌Ma1775菌株和细菌Ba-z菌株,研究了绿僵菌和细菌的形态特征和生物学特性,并进行分子鉴定,及椰心叶甲受绿僵菌和细菌侵染的代谢机制和抗氧化机制,深入研究了高致病力绿僵菌与细菌的相容性及其混配对椰心叶甲的致病力。研究结果如下:1)从椰心叶甲死亡虫体上分离得到3株具杀虫活性的病原细菌Ba-z、Ba-s、Ba-r。经形态学观察表明,3株细菌均为革兰氏阴性菌,无芽孢。27℃下,Ba-z和Ba-s菌落在NA培养基上呈圆形,无色,边缘整齐。Ba-r菌落在NA培养基上呈圆形,红色,边缘整齐。3株细菌在42℃下生长较慢。温度对菌落颜色有影响,Ba-r在22℃到42℃的温度下,菌落颜色呈亮红—深红—粉红—无色的变化。经16S rDNA同源性比对分析表明,细菌Ba-r为沙雷氏菌Serratia marcescens ssp.,细菌 Ba-s 和细菌 Ba-z 均为 Alcaligenes faecalis ssp.phenolicus。2)采用喷菌法测定3株细菌菌株对椰心叶甲的致病力。结果表明,以（1±0.5）×1012 cfu·mL-1菌悬液接菌,Ba-z菌株对椰心叶甲的致病力最强,接菌后10d,该菌株处理后对成虫、5龄幼虫、4龄幼虫、2～3龄幼虫的校正死亡率分别为（55.35±0.30）%,（16.29±4.77）%、（41.14±2.35）%和（82.96±2.95）%,LT50 分别为（8.14±0.33）、（36.98±3.74）、（15.14±2.95）和（4.31±0.10）d。处理后 6d 的 LC50分别为 2.79×1016、3.98×1018、1.03×1018 和 1.27×108cfu·mL-1。因此,Ba-z 菌株有较大应用潜力,尤其对其2～3龄幼虫更有致死效果。3)采用喷菌法测定5株绿僵菌菌株对椰心叶甲的致病力。结果表明,以（1±0.5）×107孢子·mL-1绿僵菌孢悬液接菌,分离自椰心叶甲的Maxm-07和Maxmn-05菌株对椰心叶甲有较好的致病效果,但Ma1775菌株对椰心叶甲的致病力最强,接菌后10 d,成虫的校正死亡率和僵虫率分别为（67.96±3.66）%和（60.59±1.31）%,LT50为（7.11±0.52）d;5龄幼虫的校正死亡率和僵虫率分别为（78.53±2.73）%和（73.55±3.22）%,LT50 为（5.77±0.38）d;4 龄幼虫的校正死亡率和僵虫率分别为（82.59±2.48）%和（77.86±3.44）%,LT50为（5.80±0.14）d;2～3龄幼虫的校正死亡率和僵虫率分别为（73.46±4.60）%和（69.50±3.87）%,LT50为（6.49±0.12）d。Ma1775 菌株对该虫各虫龄 6d 的 LC50分别为 3.52×108、7.13×107、2.48×107和7.96×107孢子·mL-1。通过TDM模型分析,成虫的死亡高峰期在3～6d,幼虫的死亡高峰期在3～7 d。该菌株在椰心叶甲的生物防治中有重要的应用潜力。同时,有待进一步研究Maxm-07和Maxm-05菌株对该虫的致病条件与机理,提高其对椰心叶甲的致病力。4)通过对3株绿僵菌形态学观察和分子鉴定,绿僵菌Maxm-07和Ma1775为均为绿僵菌小孢变种Metarhizium anisopliae var.anisopliae,Maxm-05为金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae var.。观察3株绿僵菌在5种培养基的生长情况发现,Ma1775和Maxm-07菌株在SDAY培养基上生长最好,产孢量最大。菌落生长速率分别为10.854和10.362 mm·d-1,产孢量分别为（8.27±1.12）×106和（6.98±0.67）×106孢子·mm-2。Maxm-05菌株在SMAY培养基和PPDA培养基上生长都较好,在两种培养基上的菌落生长速率分别为6.155和5.803 mm·d-1,其在PPDA培养基上产孢量最大,15 d后产孢量为（4.87±1.25）×106孢子·mm-2。3株菌株最适生长和产孢温度均为27℃。5)为了研究感染椰心叶甲的3株病原细菌与高致病力绿僵菌Ma1775的相容性,测定细菌发酵液及其挥发物对绿僵菌的孢子萌发、菌落生长和产孢量的影响。结果表明,3株病原细菌对绿僵菌Ma1775的孢子萌发和菌落生长均会抑制。绿僵菌Ma1775在Ba-r、Ba-z、Ba-s细菌挥发物影响下,27℃培养48h时,孢子萌发率均低于15%,显著低于对照的（90.05±1.28）%;在含有3种细菌发酵液的培养基上,绿僵菌Ma1775的孢子萌发率随发酵液浓度的增加而下降,27℃培养48 h后,孢子萌发率均低于60%,显著低于对照,培养96h后,萌发率与对照差异不显著;绿僵菌Ma1775在Ba-r、Ba-z、Ba-s细菌挥发物影响下,其培养10d的菌落直径分别（16.28±0.69）、（14.63±0.71）和（12.68±0.51）mm,显著低于对照的（20.98±0.87）mm;在含有10%的3种细菌发酵液的培养基上,27℃下培养10 d后,其菌落直径分别（28.22±0.21）、（28.18±0.25）和（28.25±1.45）mm,显著低于对照;在3种细菌挥发物影响下,绿僵菌Ma1775的产孢量分别为（1.23±0.33）×106、（0.90±0.42）× 106 和（0.72±0.18）×106孢子·mm-2,显著低于对照的（5.18±0.92）×106 孢子·mm-2;在含有10%的3种细菌发酵液的培养基上,绿僵菌Ma1775的产孢量分别为（2.01±0.31）×106、（1.43±0.44）×106和（1.17±0.23）×106孢子·mm-2,显著低于对照。因此,3种细菌发酵液及其挥发物对绿僵菌的孢子萌发、菌落生长及产孢均有较强的抑制作用。进一步评价细菌Ba-z与绿僵菌Ma1775混配对椰心叶甲的致病力。结果表明,以（1±0.5）×1012 cfu·mL-1 Ba-z 菌悬液和（1±0.5）×107孢子·mL-1 Ma1775 孢悬液以体积比6:94混合接菌后10 d,椰心叶甲成虫、5龄幼虫、4龄幼虫、2～3龄幼虫的僵虫率分别为（21.96±0.46）%、（44.81±5.01）%、（33.02±5.60）%和（22.09±3.52）%,显著低于绿僵菌Ma1775处理的僵虫率,但相对使用细菌单剂有显著增效作用。因此,细菌Ba-z对绿僵菌Ma1775的致病力有抑制作用。6)采用动物呼吸作用测量仪,研究了绿僵菌Ma1775和细菌Ba-z侵染过程中,椰心叶甲的呼吸速率和体重的变化。结果表明,分别以（1±0.5）×107孢子·mL-1 Ma1775孢悬液和（1±0.5）×1012 cfu·mL-1 Ba-z菌悬液接菌后,椰心叶甲各虫龄体重仍继续增长,但较对照增长慢,第4d后体重开始下降;用绿僵菌接菌后,椰心叶甲各虫龄前2d呼吸速率逐渐上升,3～4 d后开始下降。用细菌接菌后,椰心叶甲成虫前2d呼吸速率逐渐上升,第2d后开始下降,4龄幼虫和5龄幼虫呼吸速率第3 d后才开始下降。说明病原菌侵染可阻断昆虫能源物质的氧化代谢,通过阻断昆虫气体交换杀死害虫。7)采用分光光度法测定感染绿僵菌和细菌后,椰心叶甲体内POD活性变化。结果表明,以（1±0.5）×107孢子·mL-1绿僵菌孢悬液或（1±0.5）×1012 cfu·mL-1细菌悬液接菌后,椰心叶甲各虫龄体内过氧化物酶（POD）活性在2～3d内达到高峰,之后迅速下降,甚至低于对照。说明接菌后2～3d,椰心叶甲体内POD对防御病原菌侵染起到较强作用。