猪卵泡卵母细胞玻璃化冷冻与体外培养的研究

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本实验以屠宰厂采集的猪卵巢为材料,从中收集猪卵母细胞,进行玻璃化冷冻、体外培养及培养过程中NO含量变化以及不同大小卵泡NO含量测定研究,结果表明: 1.不同发育时期卵母细胞的冷冻效果有一定差异,未成熟的猪卵巢卵母细胞冷冻后形态正常率和存活率都低于正在成熟(培养24h)和已经成熟(培养44h)的卵母细胞,已经成熟的卵母细胞冷冻后损伤最小(形态正常率83.93%),存活率最高(69.64%)。卵母细胞的NO含量随着成熟而逐渐降低。每个卵母细胞NO含量由0.480±0.026umol/L降到0.378±0.061umol/L。 2.卵泡φ>6mm的卵母细胞冷冻后形态正常率,卵丘细胞扩展率,第一极体排出率比φ<3mm的卵泡卵母细胞高。φ>6mm卵泡卵母细胞形态完整率,卵丘细胞扩展率,第一极体排出率分别为84.78%、53.26%、35.70%,而φ<3mm卵泡卵母细胞相应为60.19%、41.67%、9.26%,两者差异极显著(P<0.01)。 3.不同载体对卵巢卵母细胞玻璃化冷冻效果不同,本实验表明麦管组不及GMP组,两者解冻后形态正常率分别为71.12%、50.04%;存活率分别为83.16%、62.50%,解冻后形态正常率差异极显著(P<0.01),存活率差异不显著(P>0.05)。 4.用GMP法比较10%EG与10%DMSO预处理液,玻璃化冷冻液EFS30、EFS40对猪GV期卵母细胞冷冻效果,研究发现其解冻后形态正常率、培养24h卵丘细胞扩展率有不同,但其统计差异不显著(P>0.05)。 5.在研究卵泡液对猪卵母细胞体外成熟的影响中发现,成熟液中添加10%PFF可以促进猪卵母细胞的体外成熟,使成熟率由60.06%提高到82.89%。 6.不同直径卵泡卵母细胞体外培养成熟44h后发现其卵丘细胞扩展率,第一极体排出率不同,φ为3—6mm最高,φ>6mm次之,φ<3mm最小,分别为73.26%、50%);(62.79%、38.37%);(54.48%、30.56%),三者差异显著(P<0.05)。大卵泡含NO最少,每个为2.618±0.341umol/l、中卵泡含NO次之,每个为3.840±0.321umol/L、小卵泡含NO最多,每个为4.597±0.685 umol/L、三者差异极显著(P<0.01)。
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