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铁皮石斛是兰科石斛属植物铁皮石斛的新鲜或干燥茎,味甘、性微寒,具有生津滋阴,益胃生津等功效。中医用石斛时讲究鲜品为上,常取其自然汁服用,相对于干品,新鲜石斛往往具有更好功效,而且能保持了原有风味。但由于储存、加工、运输等方面的限制,目前市场上铁皮石斛多以干品枫斗入药,药理活性降低,难以适应临床的需求。目的:开发石斛鲜药加工技术,研究开发出科技含量高、服用方便、效果明显、有较强针对性、价格适中的铁皮石斛鲜药。方法:以铁皮石斛鲜药为研究对象,将超高压技术应用于铁皮石斛鲜药的加工,实现铁皮石斛鲜药的超高压杀菌、促溶出的目的,保证铁皮石斛原有的营养价值、色泽和天然风味,同时提高鲜石斛汁中主要活性成分的溶出率。1.以杀菌、促溶出为指标优化建立超高压铁皮石斛鲜药加工工艺首先采用单因素方法,考察不同压施压时间、施压压力以及温度对于铁皮石斛鲜药中总微生物、大肠杆菌、霉菌以及酵母菌杀灭作用的影响,确定超高压杀菌工艺参数。采用硫酸苯酚法测定多糖含量,考察时间、温度、压力对于铁皮石斛鲜药中多糖溶出的影响,然后对单因素筛选出的各最佳条件做响应面分析,确定最佳工艺。2.超高压铁皮石斛鲜药体内外抗氧化活性研究以DPPH清除率、ABTS清除率以及·OH自由基清除率为指标,采用紫外分光光度法考察超高压铁皮石斛鲜药体外抗氧化能力;另外,构建酒精性肝损伤小鼠模型,以T-AOC、MDA、SOD、GSH以及CAT作为指标探讨超高压铁皮石斛鲜药及铁皮石斛鲜药在体内抗氧化活性;采用HE染色法观察小鼠肝组织病理切片病变情况。3.超高压铁皮石斛鲜药质量标准研究采用薄层鉴别定性考察铁皮石斛超高压处理后成分变化,另外采用硫酸苯酚法考察多糖含量,定量考察成分改变,另外从微生物检查等方面考察铁皮石斛质量标准。结果:1.当压力达到300MPa时,铁皮石斛鲜药中微生物可被完全杀灭,在336.8MPa、18.9min、35.7℃条件下,铁皮石斛鲜药中的多糖含量最高。综合杀灭微生物与促进多糖溶出工艺,确定了超高压铁皮石斛鲜药加工工艺为330MPa、18min、35℃。2.体外抗氧化研究发现,同等浓度下,超高压铁皮石斛自由基清除率均高于鲜铁皮石斛。体内抗氧化研究发现,各个指标下超高压铁皮石斛鲜药三个剂量组之间的差异明显,铁皮石斛鲜药三个剂量组差异同样明显;同等剂量下,超高压铁皮石斛抗氧化能力强于鲜药组。3.薄层鉴别显示阳性对照药材与超高压铁皮石斛鲜药在相同位置均能出现相同颜色斑点,超高压铁皮石斛鲜药多糖含量为3.09±0.12mg·mL-1,未发现存活微生物。结论:1.超高压铁皮石斛鲜药加工灭菌及促进溶出最佳工艺为330MPa、18min、35℃。2.铁皮石斛本身具有很好的体内抗氧化活性,同时超高压技术更能较好的增强铁皮石斛的抗氧化能力。3.从性状、鉴别、含量测定、微生物检查以及褐变度等方面研究了超高压铁皮石斛鲜药,制订了超高压铁皮石斛鲜药的质量标准草案。