人剪切修复基因XPD对人肝癌细胞中Ets-1和Cdk6基因的调控作用

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目的:研究野生型XPD基因转染入人肝癌细胞SMMC-7721后,细胞内XPD、Ets-1和Cdk6基因的表达情况以及对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响。方法:应用瞬时转染法将人工合成的pEGFP-N2-XPD重组质粒通过Lipofectamine2000TM脂质体转染入SMMC-7721细胞。实验分为转染重组质粒细胞SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD组、转染空载质粒细胞SMMC-7721-pEGFP-N2组、脂质体组、空白对照组,共四组。用逆转录PCR(RT-PCR)检测四组细胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因的mRNA表达量,蛋白印迹法(Western blot)检测四组细胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因的蛋白质表达情况,并用流式细胞仪和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)分别检测四组细胞周期变化和细胞的增殖活力。结果:四组细胞中,发现在转染XPD的细胞组中,XPD的mRNA和蛋白表达明显增高(P<0.01),Ets-1、Cdk6的mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.01),其它三组没有差异。流式细胞仪检测发现与其他三组相比,转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后细胞难于进入S期,停滞在G1期。MTT检测示野生型XPD转染入SMMC-7721后较其他三组细胞增殖能力减弱。结论:野生型XPD基因可能通过抑制Ets-1、Cdk6基因的表达干扰肝癌细胞的生长。
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