论文部分内容阅读
本论文应用薄层色谱(TLC)-生物自显影技术和微孔高通量筛选,两种体外实验的筛选方法,对51个天然产物样品的乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)的体外抑酶作用进行筛选,期望从中筛选出对AChE和BuChE都具有抑制作用而且抑酶效果最强的胆碱酯酶(ChE)双重抑制剂。当浓度为1mg/ml时,从51个天然产物样品中筛选出了11个对AChE和BuChE同时具有抑制作用的天然产物,其中独活、蛇床子、前胡抑酶作用较强,总ChE抑制率大于50%,其对AChE和BuChE的抑制率分别为32.22±4.32%,31.8±0.72%,23.33±3.51%；32.09±4.62%；22.00±2.00%,47.70±1.13%。通过查阅独活、蛇床子、前胡的相关文献,发现独活的醇提物可通过改善学习记忆能力,降低脑组织AChE活性等方面来延缓老年痴呆(AD)的发生,但是关于独活抑制AChE作用的活性成分至今还没有人报导过,所以本次实验重点对独活进行胆碱酯酶抑制作用活性成分的研究,预期从中发现活性更强的有效成分,从而为防治早老性痴呆症的药物研究提供有价值的活性先导结构。独活为伞形科植物重齿毛当归Angelica pubescens Maxim. f.的干燥根,主要产于我国湖北和四川省,其主要的化学成分为香豆素和挥发油类,作为传统的中药独活具有祛风除湿,通痹止痛的功效,现代药理学研究表明独活具有抗炎,抗氧化,抗肿瘤,降低脑组织ChE活性延缓AD的发生等作用。本论文对近30年来国内外学者关于独活药材中的主要化学成分和药理作用的研究进展及文献进行了综述。本论文应用薄层色谱(TLC)-生物自显影技术和微孔高通量筛选的方法,对独活的挥发油部分和非挥发油部分抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的活性进行了研究,非挥发油部分分别用石醚,氯仿,乙酸乙酯,正丁醇萃取分成了5个部分,独活挥发油对AChE和BuChE的抑制率分别为92.38±0.81%,63.74±1.48%.其IC50分别为0.21±0.006μ.1/ml,0.47±0.30μl/ml。挥发油部分作为一种混合物其抑制作用较好,可对其主要的化学成分做进一步的研究。独活非挥发油部分,在TLC-生物自显影抑酶实验中独活乙醇提取物,石油醚和氯仿萃取部位呈现阳性结果；微孔高通量筛选实验中独活乙醇提取物、石油醚及氯仿萃取部位对乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)均具有抑制作用,浓度为1mg/ml时,三个部位对AChE的抑制率分别为16.88±0.42%,11.82±0.55%,44.33±3.21%；对BuChE的抑制率分别为13.97±1.17%,14.644±1.10%,18.63±1.24%。独活的氯仿萃取部分抑酶活性最强,所以本论文主要对独活非挥发油部分中的氯仿部位进行抑酶活性成分的研究。本论文采用常压硅胶色谱,SephadexLH-20柱色谱,HPLC制备等多种现代分离技术和手段,从独活的氯仿萃取部分中共分离得到了12个化合物,并通过化学法及其多种先进的波谱技术(UV,1HNMR,13CNMR)鉴定了其中的8个化合物的结构,分别为甲氧基欧芹素,二氢欧山芹素,二氢欧山芹醇乙酸酯,花椒毒素,二氢欧山芹醇,没药当归烯酮,伞形花内酯,异当归醇。其余的4个化合物RAP VII, RAPX, RAPXI, RAPXII正在鉴定当中。本论文采用微孔高通量筛选法对从独活氯仿部位分离得到了10个单体化合物进行了胆碱酯酶抑制作用的筛选,结果显示10个单体化合物均具有胆碱酯酶的抑制作用,其中当浓度为1mg/ml时,蛇床子素和二氢欧山芹素对胆碱酯酶的抑制率大于50%,蛇床子素对AChE和BuChE的抑制率分别为90.25±2.67%,68.50±2.71%.其IC50分别为489.94±22.12μM,1312.34±53.62nM.二氢欧山芹素对AChE和BuChE的抑制率分别为59.67±2.27%,39.32±1.67%.其对AChE的IC50为1238.91±79.49μM,而阳性药Galanthamine对AChE和BuChE的IC50分别为0.37gM和8.3μM,结果显示独活非挥发油部分IC50与阳性药相比,蛇床子素对AChE和BuChE都具有抑制作用,其抑制作用一般,本论文只做了体外的抑酶实验,所以说有必要对其进行体内实验,药代动力等实验的研究,对其在体内的吸收及入血情况进行更加深入的研究。