桦褐孔菌(Inonotus obliquus (Fr.) pilat)是一种十分珍稀而名贵的药用真菌,俄语名Chaga,常规药用部位是菌核。16-17世纪以来,在俄罗斯、东欧等民间被广泛利用来预防和治疗各种疑难杂症,例如各种脏器及消化器官癌症、心脏病、糖尿病等。传统应用的桦褐孔菌有效成分大部分是从子实体中提取的,但现阶段其野生资源稀少,大规模人工栽培尚难实现,因此对桦褐孔菌进行液体深层发酵培养,具有生产周期短,成本低的优点,从而对桦褐孔菌的开发和利用具有更深远的意义。本文通过发酵罐液体深层发酵培养获得桦褐孔菌发酵浸膏多糖,并对其抗炎作用、镇痛作用、保肝作用及抗衰老作用进行了研究,为药用真菌在肝炎的治疗及老龄人群身体机能的改善方面提供了深入研究的基础；同时通过急性毒性试验和遗传毒性试验对桦褐孔菌发酵浸膏多糖进行了初步的毒理评价研究,为桦褐孔菌发酵浸膏多糖在食药用保健品开发领域的应用提供了安全性依据。实验结果如下：1、通过建立醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀及棉球致小鼠皮下肉芽增生模型考察了桦褐孔菌发酵浸膏多糖抗急性炎症及慢性炎症的能力。结果表明,桦褐孔菌发酵浸膏多糖对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高有显著的抑制作用(P<0.01或p<0.05)；对二甲苯所致小鼠耳肿胀的最高抑制率为40.79%；角叉菜胶所致小鼠足肿胀试验中,在致炎后第3h、4h、5h对小鼠足肿胀均有显著的抑制作用(p<0.01或p<0.05)；各剂量组的桦褐孔菌发酵浸膏多糖均表现出对棉球所致小鼠肉芽增生的极显著抑制作用(P<0.01),其中高剂量组桦褐孔菌发酵浸膏多糖的抑制率为52.10%。2、以醋酸致小鼠腹部收缩试验和热板致小鼠足部疼痛试验为模型,对桦褐孔菌发酵浸膏多糖的镇痛作用进行了研究。结果表明,扭体试验中,高、中、低剂量组的桦褐孔菌发酵浸膏多糖均可显著延长小鼠注射醋酸后的疼痛潜伏期,并有效减少小鼠因腹痛而引起的扭体次数,其中桦褐孔菌发酵浸膏多糖高剂量组的扭体抑制率为48.38%,高于中、低剂量组；热板试验中,各剂量组桦褐孔菌发酵浸膏多糖在给药后不同时间对热刺激诱发的小鼠的舔足反应均无显著的抑制作用。3、在建立卡介苗(BCG)与脂多糖(LPS)共同诱导的小鼠免疫性肝损伤模型的基础上,以小鼠肝脏、脾脏和胸腺指数；血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白介素-12(IL-12)、白介素-18(IL-18)；小鼠肝匀浆中肿瘤坏死因子(TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)、一氧化氮(NO)水平及丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性为指标,同时还采用HE染色法制作肝脏组织切片,观察肝脏病理学变化,对桦褐孔菌发酵浸膏多糖的保肝作用进行研究。结果表明,与模型组相比,各剂量组桦褐孔菌发酵浸膏多糖可有效减少肝损伤小鼠血清中ALT、AST、IL-12、IL-18含量；降低肝脏中NO、TNF-α、INF-γ水平,抑制MDA在肝脏中的积累,同时提高SOD的活性；形态学上的肝细胞变性坏死的现象得到明显的改善。可见,桦褐孔菌发酵浸膏多糖对BCG/LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高小鼠体内抗氧化酶的活性和降低脂质过氧化物水平,降低细胞因子水平,调节免疫功能等有关。4、通过建立D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型,以小鼠脾脏、胸腺指数,血清、肝脏和脑组织中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量为指标,考察了桦褐孔菌发酵浸膏多糖的抗衰老作用。结果表明,造模6w结束后,与模型组相比,3个剂量组的桦褐孔菌发酵浸膏多糖均能够显著提高衰老小鼠脾脏、胸腺指数；增强血清、肝脏和脑组织中的3种抗氧化酶的活性、降低其中MDA含量,表明桦褐孔菌发酵浸膏多糖可有效对抗衰老小鼠的免疫器官萎缩、增强体内抗氧化酶的活性,减少脂质过氧化反应的发生,具有较好的延缓衰老的作用。5、通过急性毒性试验、小鼠精子畸形试验及骨髓细胞微核试验对桦褐孔菌发酵浸膏多糖的急性毒性和遗传毒性进行评价。结果表明,急性毒性试验中,桦褐孔菌发酵浸膏多糖在一次最大给药剂量(24g／kg)条件下给予小鼠灌胃后,小鼠未表现出任何中毒反应,显示实验小鼠对桦褐孔菌发酵浸膏多糖最大耐受量大于24g／kg,属实际无毒；精子畸形试验中,环磷酰胺组的小鼠精子畸形率与生理盐水阴性对照组比较有显著差异,和桦褐孔菌发酵浸膏多糖各剂量组存在显著性差异,而浸膏多糖各剂量组小鼠精子畸形率与生理盐水阴性对照组比较无显著差异,精子畸形试验结果为阴性；骨髓细胞微核试验中,环磷酰胺组小鼠的骨髓细胞微核率与生理盐水阴性对照组和桦褐孔菌发酵浸膏多糖各剂量组存在显著性差异,而多糖组和生理盐水阴性对照组之间微核率无显著性差异,骨髓细胞微核试验结果为阴性。综上所述,可初步证明桦褐孔菌发酵浸膏多糖不具有急性毒性,且无致突变和生殖毒性作用。综上所述,桦褐孔菌发酵浸膏多糖具有良好的抗炎、镇痛作用,并能有效对抗小鼠免疫性肝组织损伤,在肝炎治疗及辅助治疗方面具有良好的开发前景；毒理评价也表明桦褐孔菌浸膏多糖不具备急性毒性和遗传毒性,在保健品领域具有开发利用的安全基础和保证。