嗜酸乳杆菌NCFM对变异链球菌生长的影响及其LuxS基因表达载体的构建研究

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本文主要从以下几个部分展开论述:  实验一 嗜酸乳杆菌NCFM对变异链球菌UA159生长影响的研究  目的:  在对实验菌株嗜酸乳杆菌NCFM进行基因测序,判定其为标准菌株的前提下,通过将嗜酸乳杆菌NCFM与变异链球菌UA159共培养,研究嗜酸乳杆菌NCFM对变异链球菌UA159生长的影响。  方法:  将实验菌株纯化培养后,提取嗜酸乳杆菌NCFM基因组DNA进行多聚酶链反应(PCR)后进行16S rDNA测序,与标准菌株进行对比分析。判定其是否为标准菌株。将标准菌株嗜酸乳杆菌NCFM和变异链球菌UA159分为四个实验组进行共培养:①接种嗜酸乳杆菌NCFM于BHI液体培养基中(A组);②接种嗜酸乳杆菌于MRS液体培养基中(B组);③接种变链菌于BHI液体培养基中(C组);④同时接种变链菌和嗜酸乳杆菌于BHI液体培养基中(D组),检测并建立四组细菌的48h生长曲线图。  结果:  实验菌株凝胶电泳结果显示在约1.5kb处出现荧光条带;基因测序结果与NCBI库中标准菌株的相似度大于99%,具有较高的相似度,可判定实验菌株为标准菌株。四组细菌生长曲线的趋势较为一致,其中在同一时间上B组OD值均高于其他组,D组迟缓期时间最长,对数期及以后OD值介于A、C两组之间,6~10h OD值:C>D>A,10h~48h OD值:A>D>C。通过将D组与A、C两组OD值之和对比发现,同一时间点上D组值均较低。  结论:  1、嗜酸乳杆菌NCFM的优势培养基是MRS培养基;  2、嗜酸乳杆菌NCFM和变异链球菌UA159具有相互竞争抑制作用。  实验二 嗜酸乳杆菌NCFM LuxS基因同源重组表达载体的构建  目的:  为了研究LuxS基因对嗜酸乳杆菌NCFM的调控作用,通过同源重组法构建其LuxS同源重组质粒,为下一步构建嗜酸乳杆菌NCFM突变株做准备。  方法:  将嗜酸乳杆菌NCFM标准菌株活化后,根据NCBI上查询的LuxS基因上下游序列构建一对引物,通过PCR技术,将该片段与pUC57质粒连接,构建pUC57-LBA1081基因表达载体,转化入大肠杆菌DH5α后进行阳性克隆的筛选。  结果:  经过PCR凝胶电泳结果显示,LuxS基因上下游同源序列成功连入到pUC57质粒相应酶切位点。  结论:  成功构建了嗜酸乳杆菌NCFM LuxS基因的同源重组表达载体pUC57-LBA1081。
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