人脐带血血红蛋白的纯化及其自氧化实验的研究

来源 :天津工业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:honeymelonk
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输血是临床最常用的医疗手段之一。但由于血源紧张、配型繁琐及容易交叉感染等原因,近一个世纪以来人们一直在寻找安全有效的血液代用品。这也是医学研究的重点和热点之一。血液代用品是兼具携氧和扩容功能的溶液,它必须具备原料充足、无生理毒性、无免疫源性、较好的力学流变性质、较长的保存期和易于进行生理代谢等特点。血液代用品可以分为两大类:一类是基于血红蛋白类氧载体(Hemoglobin based oxygen carriers,HBOCs),另一类是氟碳类化合物乳剂(Perfluorocarbon Compounds,PFC)本文主要基于血红蛋白类氧载体的研究,通过采用Q300阴离子交换树脂从人脐带血红细胞中分离纯化血红蛋白,对其进行浓缩。并采用SDS-PAGE、 HPLC、氧饱合度等手段,对纯化样品进行检测。HBOCs原料为超纯血红蛋白。在纯化过程中失去了超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(CAT)、高铁血红蛋白还原酶等酶的保护,导致体系容易受自由基和过氧化物的影响。针对这一问题,本文将具有淬灭氧自由基的阿魏酸修饰到血红蛋白上,并测定阿魏酸的修饰度。此外,还在加入叠氮钠、黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶氧化介质的条件下,探讨了阿魏酸修饰血红蛋白的修饰度与其自氧化速率的关系。实验结果:(1)用Q300阴离子交换树脂,成功纯化了人脐带血血红蛋白,其中高铁血红蛋白含量低于1%。所得产品经凝胶成像系统分析其银染后的SDS-PAGE,测得其纯度为99.10%±0.70%:HPLC图谱检测纯化后的血红蛋白未见其他杂峰;经氧饱和合度测定,纯化前后血红蛋白的氧合曲线无明显偏移,不影响其携氧功能;(2)经阿魏酸修饰后的血红蛋白结构及载氧活性未受到影响。随着阿魏酸修饰度的增加,血红蛋白在PBS溶液里的自氧化速度减慢。此外,将修饰后的血红蛋白在叠氮钠、黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶氧化介导下进行自氧化测定,也表现出了较好的抗氧化能力,且其抗氧化能力随阿魏酸的修饰度增大而增强。
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