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多酚化合物是自然界中存在的一种非常重要的天然抗氧化剂,可以通过清除自由基,络合金属离子,作用于体内抗氧化酶,再生及协同增效体内抗氧化剂和提高机体免疫力等多种方式直接和间接实现抗氧化作用。近几年的研究发现,小麦麸皮包含小麦皮层,大部分的糊粉层和部分的胚乳,营养成分丰富,其中多酚化合物等抗氧化剂含量较高。但迄今为止,小麦麸皮都未能得到很好的利用。本课题选择小麦麸皮作为原材料,以多酚化合物作为研究对象,对小麦麸皮多酚化合物进行分离纯化,并对提取的麦麸多酚化合物进行体内外抗氧化活性的研究,为合理利用小麦麸皮资源提供理论依据。本文首先采用不同溶剂萃取方法制备小麦麸皮多酚化合物,以总酚含量和DPPH?清除活性为参数进行方法比较,筛选最适溶剂及配比度。根据两种参数比较结果,最终确定80%乙醇水溶液为最佳萃取溶剂。通过静态和动态吸附实验,从四种大孔吸附树脂中筛选出适合于小麦麸皮多酚化合物富集的树脂。静态吸附实验结果表明,四种树脂吸附量从大到小依次为H1020>DA201-C>NKA-II>NKA-9;解吸率从大到小依次为NKA-9>DA201-C>H1020>NKA-II。大孔树脂动态吸附实验条件为:柱床体积(BV)为350 m L,上柱样品浓度3 mg/m L,上柱速率为2 m L/min,上样量400 m L。上样后用乙醇进行梯度洗脱,乙醇浓度(V/V)分别为20%、40%、60%、80%。选择紫外检测器,在310 nm处对上样液及洗脱液进行检测收集,得到16种富集样品,并定义为麦麸多酚化合物(WBPE)。所有样品均进行后续实验以确定最佳的富集方法。然后采用Acquity UPLC-TQD检测技术对16种WBPE中已知多酚化合物的含量进行分析测定。选择的流动相A为乙腈溶液,流动相B为0.1%(v/v)甲酸水溶液=5:95,保持0.8 min,在1.2 min上升至10:90(A:B),然后在2.4 min比例为15:85,持续1.3 min后,到4 min进一步调整比例为21:79,之后是7.8 min为50:50,持续1 min,第8.8 min为100:0,之后0.5 min之内调整为初始比例5:95。确定选择标准样品质谱采集参数为m/z 163.08>119.64邻香豆酸;m/z 163.08>119.15对香豆酸;m/z 193.00>134.10阿魏酸;m/z 169.05>125.00没食子酸;m/z 181.08>43.03橄榄醇,其中橄榄醇采用ES+,其余四种采用ES-。分析比较各样品中几种多酚化合物的含量,发现阿魏酸的含量最高,对香豆酸含量次之,其余三种多酚化合物的含量很少。而且在16种WBPE中,WBPE-N9-4的阿魏酸含量、对香豆酸含量以及5种多酚化合物总量均呈现最高值。接下来,在细胞水平对WBPE的抗氧化活性进行进一步研究分析。研究采用H2O2诱导构建HEK293细胞氧化损伤模型,最终建立损伤模型为H2O2浓度为1 mmol/L,细胞接种数量为每孔3×104个,作用时间为2 h。在此模型下对16种WBPE进行细胞水平抗氧化活性分析,通过比较细胞存活率和ROS结果可知,WBPE-N9-4的抗氧化能力最强,适合更进一步的抗氧化活性研究。通过倒置显微镜观察受损细胞状态,结果表明采用WBPE-N9-4对模型细胞进行预保护处理,能够明显减少受损细胞数目,维持细胞原有状态,防止细胞缩小和DNA片段化。采用试剂盒检测细胞内抗氧化酶促体系活性和脂质过氧化产物的含量,结果表明,WBPE-N9-4可以显著提高HEK293细胞内SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA水平。H2O2对HEK293细胞具有损伤作用,导致其LDH释放率显著升高(13.09%),经过WBPE-N9-4(0.10 mg/m L-1.00 mg/m L)对HEK293细胞的预保护,使HEK293细胞LDH释放率由模型组的13.09±1.14%分别下降至11.86±1.05%到7.64±0.40%,LDH释放率显著降低(p<0.05)。通过流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、细胞线粒体膜电位,结果表明,WBPE-N9-4可以调控细胞周期比例,降低Sub-G1峰所占比例;同时可以减少细胞凋亡;并且可以阻止线粒体膜电位的降低。最后,通过体内实验对高脂饲料的小鼠灌胃WBPE-N9-4,结果表明灌胃WBPE-N9-4能够提高喂养小鼠的抗氧化能力。与Control组相比,高脂膳食(A组)能够显著提高小鼠体重(p<0.05),小鼠内脏重量均具有显著性差异(p<0.05),A组的TC、TG、LDL-C均高于Control组,HDL-C低于Control组,数据差异显著(p<0.05)。组织切片显示,A组小鼠肝肾脏组织切片,可以看见明显脂肪变性出现空泡,细胞肿胀变形,细胞核不清晰。然而,多酚化合物能够有效控制高脂膳食小鼠的体重(p>0.05),且与A组相比较,WBPE-N9-4组不同剂量(B、C、D组)小鼠体重明显降低,且小鼠体重变化具有显著性(p<0.05)。与A组相比,小鼠内脏B组没有显著性变化(p>0.05),C、D组具有显著性变化(p<0.05),与Control组相比,C组不具有显著性(p>0.05),表明麦麸多酚化合物能有效控制高脂膳食小鼠内脏变化。同时C、D组的TC、TG、LDL-C低于A组,且数据差异显著(p<0.05),说明麦麸多酚化合物对血脂调节具有良好的作用,且其对TG和HDL-C的调节作用明显。组织切片表明B、C、D组细胞逐渐恢复正常,空泡减少,表明多酚化合物对高脂膳食小鼠肝肾脏组织脂肪病变有抑制作用。