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植物激素是植物体内的一系列活性物质,它们一般含量极低(大约ng/g鲜重),但是却影响调控了植物体从种子萌发,生长,分化到成熟,生殖等所有的生理过程。细胞分裂素与生长素是重要的两类植物激素。它们在植物体内具有协同作用,影响植物细胞的分裂,增大,促进组织分化,器官伸长。对于这两类植物激素的生物作用机理,目前尚不十分清楚,也是当前植物学研究的热点。这方面的研究受限于植物组织中这两类植物激素的检测方法。由于这两类激素在植物体内含量较低,且植物组织基质复杂,因此它们的检测方法一直是个难点。另外,这两类植物激素组成复杂,在植物学研究中需要某些特定化合物的检测方法也是目前缺少的。本论文针对目前这两类植物激素检测中存在的问题,从样品处理方法,新的检测方法以及标准品合成几方面进行了研究。本论文一共包括以下内容: 第一章综述了细胞分裂素和生长素检测方法的研究进展,着重介绍了现有方法的特点以及局限性,并由此提出本论文的研究目标和思路。 第二章制备并表征了反式玉米素核苷的多克隆抗体。所制得的抗体对反式玉米素核苷的亲和常数达到1.7×109 L/mol,并且表现出对其6位N取代基的识别能力。利用此抗体制得的免疫亲和胶对细胞分裂素具有特异性结合提取作用,在吸附容量大于样品中细胞分裂素含量时,对异戊二烯型细胞分裂素表现出广谱亲和性。优化选择了固相萃取纯化方法作为预纯化方法,以免疫亲和胶作进一步纯化,建立了植物组织中8种细胞分裂素的LC-MS检测方法,并对200 mg拟南芥叶片以及烟草叶片中的细胞分裂素进行了检测。所建立的方法比原有的方法在样品处理方法以及检测灵敏度两方面都有所改进,可以作为植物组织中细胞分裂素检测的常规方法。 第三章针对目前对吲哚乙酸及其衍生物需要分步测定的现状,开发了对吲哚乙酸(IAA)及其甲酯(MeIAA)同时快速检测方法。以乙腈作为提取溶剂,避免了传统提取剂甲醇中IAA与MeIAA的相互转化。优化了液相流动相,使用二级质谱碎片离子定量排除基质中杂质干扰。该方法在样品处理中无需水解,纯化,衍生化等操作,从样品处理到检测完成时间少于4小时,是非常简便的检测方法。测定实际样品中IAA以及MeIAA的回收率都达到了80%以上,说明粗提液中的其他物质并没有对检测信号造成很大的抑制。使用该方法,成功在20 mg拟南芥根部以及玉米种子中检测了IAA以及MeIAA。 第四章合成了吲哚乙酸肌醇复合物(IAInos)并分离得到其4个异构体。结合第三章工作成果,建立了对IAInos,IAA以及MelAA同时检测的快速检测方法,并对不同基因型拟南芥根部的IAInos含量进行了对比。 本论文的研究改善了现有的细胞分裂素及生长素的检测方法,为进一步研究这两类植物激素的生物功能及其分子机理提供了重要的分析手段。