日本沼虾（Macrobrachium nipponense）俗称河虾,是我国常见食用淡水虾之一,其体内的原肌球蛋白（tropomyosin,TM）为虾蟹类的泛过敏原蛋白,易引起部分敏感人群产生过敏反应。巨噬细胞参与固有免疫与适应性免疫,具有抗原提呈和激活T细胞等作用。不同的微环境中巨噬细胞可以极化成不同表型,发挥不同功能。目前,巨噬细胞极化与食物过敏的关系尚不明确。因此,本研究选择日本沼虾原肌球蛋白为过敏原,通过细胞实验、动物实验并结合转录组学综合分析日本沼虾原肌球蛋白致敏与巨噬细胞极化的关系。研究的主要方法、结果及结论如下:1、本研究以体外诱导骨髓源巨噬细胞为对象,用TM刺激不同类型巨噬细胞,通过荧光定量PCR检测巨噬细胞极化标志基因的表达来探究TM对巨噬细胞极化的影响。结果显示:TM组中M1型巨噬细胞标志基因iNOS、Fpr2、TNF-α表达量显著高于PBS组（P＜0.05）,而M2型巨噬细胞标志基因Arg1、CD206、Dectin表达量显著低于PBS组（P＜0.05）。TM刺激IFN-γ和LPS诱导的M1型巨噬细胞后,其iNOS和Fpr2表达量显著上调（P＜0.01）,TNF-α表达量略有下降,而Arg1、CD206、Dectin表达量无明显变化。TM刺激IL-4诱导的M2型巨噬细胞后,其iNOS、Fpr2、TNF-α表达量显著增加（P＜0.05）,而Arg和Dectin表达量显著降低（P＜0.05）,CD206的表达量无明显变化。该结果提示,TM可以影响体外巨噬细胞的极化,促进骨髓源巨噬细胞向M1型方向极化。2、采用巨噬细胞与嗜碱性粒细胞、脾淋巴细胞的共培养方法,研究TM对巨噬细胞极化的影响。结果显示:KU812细胞与巨噬细胞共培养后,coKM-TM组中iNOS表达量与M-TM组相比显著下降（P＜0.01）,但Arg1表达量显著增加（P＜0.01）,KU812细胞脱颗粒后可能抑制TM诱导巨噬细胞向M1转化。同时巨噬细胞使KU812细胞表达的TNF-α、IL-6、组胺和β-HEX水平下降,巨噬细胞可能抑制KU812细胞脱颗粒反应。脾淋巴细胞与巨噬细胞共培养后,coPM-TM组IL-12/23p40含量相较于TM组显著降低（P＜0.05）,而iNOS、Arg1表达量与TM组相比均显著增加（P＜0.01）,脾淋巴细胞可能使巨噬细胞向不同方向极化。同时coPM-TM组中IL-4、TGF-β表达量相较于TM组呈上升趋势,而IFN-γ表达量显著下降（P＜0.05）,巨噬细胞抑制脾淋巴细胞分泌Th1细胞因子。3、通过构建原肌球蛋白致敏模型,巨噬细胞清除模型和M1/M2型巨噬细胞回输模型进一步研究体内巨噬细胞极化与食物过敏的关系。结果显示:TM组、TDM1组和TDM2组小鼠中的IgE、IgG、IL-4、IL-5、IL-13、mMCP-1和组胺的表达均显著高于PBS组（P＜0.05）。与TM组相比,TDM1组和TDM2组在IgE、IL-4、IL-5的表达上调,IL-13、mMcp-1和组胺的表达持平,表明M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞均可能参与食物过敏反应。此外,巨噬细胞在过敏小鼠体内不同组织中的分布具有一定差异。与PBS组相比,TM组MLN的iNOS表达量显著增加（P＜0.001）,Arg1表达量显著降低（P＜0.001）,表明过敏小鼠MLN在炎症反应中可能是M1型巨噬细胞聚集的重要位置。TM组PP结iNOS与Arg1的表达均显著增加（P＜0.001）,空肠中iNOS表达量显著增加（P＜0.05）,表明PP结和空肠中有较多M1、M2型巨噬细胞。4、采用原肌球蛋白和细胞因子刺激后的小鼠骨髓源巨噬细胞进行高通量测序,筛选其差异基因和相关信号通路。结果显示:与PBS组相比,TM组有69个基因表达上调,154个基因表达下调,这些基因富集到180条通路。根据KEGG结果,选择NOD样受体信号通路、Jak-STAT信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路和PI3K-Akt信号通路。进一步利用荧光定量PCR检测这些信号通路中关键差异基因的表达,与PBS组和IL4组相比,IFNLPS组中NOD2、TLR2、AKT3、NLRP3、Caspase-1、CD14、Myd88、NFKBIA、STAT1的相对表达量显著升高,Lat的相对表达量显著下降,与测序结果一致,证明了测序结果的准确性。TM组NOD2、TLR2、NLRP3、STAT1这4个基因表达量相较于PBS组显著升高,与这4个基因相关的NOD样受体信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路可能参与原肌球蛋白诱导巨噬细胞极化的过程。总之,本研究从细胞水平和动物水平研究了日本沼虾TM对巨噬细胞极化的作用,初步阐明了TM致敏影响巨噬细胞极化的部分机制,为进一步揭示食物过敏与巨噬细胞极化的关系提供了科学依据。