【摘 要】
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红菊苣属菊科菊苣属多年生草本植物,叶球呈鲜红色。红菊苣营养丰富,其多酚含量较高,且具有诸多药理作用,如抗氧化、抗炎、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗紫外线和植物生长繁殖等。因此,菊苣多酚在药物和个护产品中具有广阔的应用前景,使其成为植物化学物领域的的研究热点。然而,红菊苣多酚的生物活性与其生物利用度息息相关,膳食中的其它营养物质常会影响其生物利用度。例如,菊苣中的膳食纤维,它不能为人体所直接吸收利用,需借
【基金项目】
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国家自然科学基金杰出青年科学基金,食品复杂碳水化合物（31825020）；
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红菊苣属菊科菊苣属多年生草本植物,叶球呈鲜红色。红菊苣营养丰富,其多酚含量较高,且具有诸多药理作用,如抗氧化、抗炎、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗紫外线和植物生长繁殖等。因此,菊苣多酚在药物和个护产品中具有广阔的应用前景,使其成为植物化学物领域的的研究热点。然而,红菊苣多酚的生物活性与其生物利用度息息相关,膳食中的其它营养物质常会影响其生物利用度。例如,菊苣中的膳食纤维,它不能为人体所直接吸收利用,需借助胃肠道中的微生物进行代谢利用,但是据报道膳食纤维可影响机体胃肠道功能、以及多酚等小分子食品功能因子的生物可及性。因此,本课题以红菊苣为原料,从中制备获得红菊苣多酚;再通过模拟体外胃肠道消化和Caco-2吸收模型,测定红菊苣膳食纤维在对消化吸收过程中红菊苣多酚的生物可及性和生物吸收的影响;最后利用Caco-2/RAW264.7细胞模型,进一步探究消化吸收后红菊苣膳食纤维对红菊苣多酚的肠道炎症的影响,以期为菊苣多酚的利用和相关功能食品的研发提供新的思路和理论依据。本论文的主要研究内容和结果如下:（1）对红菊苣多酚进行了提取、纯化并鉴定。基于响应面法对红菊苣多酚提取工艺进行优化,获得最佳提取工艺条件:乙醇浓度87.45%、料液比1:23.05（g/mL）、提取次数4次、提取时间1.82 h;采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定醇提物的总黄酮含量,此条件下红菊苣总黄酮实际提取率为4.61%。进一步采用大孔树脂对红菊苣醇提物进行纯化,比较了8种大孔树脂对红菊苣醇提物的吸附与解吸效果,结果表明:大孔树脂NKA-9为红菊苣多酚的最佳吸附树脂,最佳纯化条件为:样品溶液pH=4.0,吸附时间为2 h,洗脱液乙醇浓度60%,上样浓度为0.75 mg/mL,此时NKA-9树脂对红菊苣多酚的吸附属于多层吸附。之后,对该纯化获得的菊苣纯化物进行定性定量分析,UPLC-QTRAPMS/MS结果表明,5-咖啡酰奎宁酸为含量最高的酚酸（58.00 g/kg）,槲皮素-3-O-（6″-O-丙二酰）-葡萄糖苷为含量最高的黄酮类化合物（29.63 g/kg）。（2）体外模拟红菊苣纯化物的胃肠道消过程,结果发现:消化过程中红菊苣多酚中的花青素-3-O-（6″-O-乙酰基）-葡萄糖苷不稳定,而槲皮素-3-O-（6″-O-乙酰基）-葡萄糖苷较为稳定。引入红菊苣膳食纤维后,再进行消化模拟,结果发现:黄酮及酚酸的总量较红菊苣纯化物组有所降低,而且对各黄酮以及酚酸物质影响不同,例如加入可溶性膳食纤维后槲皮素-7-O-（6″-O-乙酰基）-葡萄糖苷在小肠消化液上清中的含量有所降低。之后,体外测定了红菊苣纯化物组（cp）、红菊苣纯化物+可溶性膳食纤维组（cp+sdf）、红菊苣纯化物+不可溶性膳食纤维组（cp+idf）、红菊苣粉组（c）的消化前后抗氧化能力的变化,结果发现:经胃肠消化后,DPPH自由基抑制能力、FRAP自由基抑制能力都明显降低,而且该两种自由基抑制能力与酚酸类化合物的5-咖啡酰奎宁酸和黄酮类化合物槲皮素-3-O-（6″-O-乙酰基）-葡萄糖苷之间具有较强的相关性。（3）基于Caco-2/RAW264.7细胞模型,评价红菊苣纯化物（cp）、红菊苣纯化物+红菊苣可溶性膳食纤维（cp+sdf）、红菊苣纯化物+红菊苣不可溶性膳食纤维（cp+idf）、红菊苣粉（c）、红菊苣可溶性膳食纤维（sdf）、红菊苣不可溶性膳食纤维组（idf）的经胃肠消化后对RAW264.7巨噬细胞炎症反应以及对Caco-2单细胞层的紧密连接蛋白的影响。结果表明:在共培养模型中,cp、cp+sdf、cp+idf、c、sdf、idf经胃肠消化后对LPS诱导的RAW264.7细胞的TNF-α的炎症因子的表达水平无显著影响。并且对RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的mRNA的水平也无显著影响。然而,cp+idf、cp+sdf组经能够增加Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1的mRNA的表达水平。
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