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目的:环状RNA(Circular RNAs,circRNAs)与胃癌(Gastric cancer,GC)的发生发展密切相关。我们旨在探讨Circular RNA-0002570(Circ-0002570)在GC发生发展过程中的作用及其潜在分子机制。方法:1、生物信息学分析技术在GC中筛选出存在表达差异的circRNA。收集兰州大学第一医院2018年1月至2019年7月经病理科明确诊断的24例GC患者肿瘤组织及癌旁组织。通过qRT-PCR检测GC标本和本课题组自有的常见GC细胞系(AGS,MKN28,MKN45,SGC7901,HGC27,BGC23)中Circ-0002570的表达情况,Kaplan-Meier曲线进行生存分析探究Circ-0002570表达情况与GC患者预后的相关性。2、为了深入研究Circ-0002570在调控GC细胞生物学功能中的作用,在体外采用慢病毒转染构建敲低Circ-0002570表达的GC细胞模型,其敲低效率通过qRT-PCR进行验证。通过CCK-8细胞增殖检测实验,Edu细胞增殖检测实验和平板克隆形成实验评估Circ-0002570对GC细胞增殖能力的影响。通过进行细胞划痕,transwell迁移和侵袭实验探究Circ-0002570对GC细胞转移能力的影响。TUNEL法检测敲低Circ-0002570对胃癌细胞凋亡能力的影响。构建裸鼠异种移植瘤模型,明确Circ-0002570在体内对胃癌细胞增殖能力的影响。3、利用RNA FISH原位杂交技术检测Circ-0002570在GC细胞亚结构中的定位。通过CircBank和CircInteractome数据库预测Circ-0002570潜在结合的miRNA及结合序列位点。用qRT-PCR检测潜在下游miR-587或miR-935过表达后GC细胞中Circ-0002570的表达情况进一步验证。Circ-0002570报告基因载体和miR-587 mimics共转染,采用双荧光素酶检测试剂盒(Promega)检测荧光素酶活性。qRT-PCR检测过表达和敲低Circ-0002570后,GC细胞中miR-587的表达情况,进一步通过RIP检测进一步揭示Circ-0002570和miR-587之间的相互结合。4、通过生物信息学分析,双荧光素酶报告检测、Western blot筛选并鉴定miR-587的下游靶点基因。利用qRT-PCR和Western blot检测GC组织中VCAN的mRNA和蛋白表达水平。使用TCGA胃癌表达谱(STAD)队列和KM在线工具进行基于VCAN mRNA表达情况的生存分析。进一步利用KEGG和GO富集分析预测VCAN的临床意义。最后通过挽救实验再次进行验证本课题发现的这一信号通路,再次通过qRT-PCR和Western blot检测VCAN的mRNA和蛋白表达。采用CCK-8细胞增殖检测实验,Edu细胞增殖检测实验,平板克隆形成实验和transwell实验验证Circ-0002570-miR-587-VCAN这一信号通路对GC细胞增殖和迁移等生物学功能的影响。结果:1、生物信息学分析结果显示Circ-0002570是GC中上调最显著的CircRNAs之一。在GC组织中Circ-0002570表达显著高于癌旁组织。与人源胃黏膜上皮细胞(GSE-1)相比,GC细胞系中Circ-0002570的表达量也显著上调。同时Circ-0002570表达量较高的GC患者生存时间较短、预后较差。2、在体外成功构建了Circ-0002570敲低表达模型。CCK-8,EdU和平板克隆形成实验发现Circ-0002570在胃癌细胞中的敲低使肿瘤细胞的增殖能力受到了抑制作用。划痕实验和Transwell检测显示转染Circ-0002570-sh的GC细胞的侵袭和迁移能力受到抑制。敲低Circ-0002570的表达能显著促进细胞凋亡。根据异种移植瘤模型的体内实验结果,我们发现敲低Circ-0002570的细胞系在裸鼠体内的生长速度比NC-sh组慢,肿瘤体积和重量也显著降低。免疫组化显示沉默Circ-0002570降低了ki-67的阳性率。Circ-0002570在一定程度上增强了GC细胞的恶性生物学行为。3、Circ-0002570在GC细胞亚结构的细胞核和细胞质中均有表达。通过在线数据库分析和qRT-PCR结果显示,miR-587过表达显著抑制GC细胞中Circ-0002570的表达。荧光素酶活性测定揭示,共转染miR-587mimics和Circ-0002570-WT显著降低了荧光素酶活性。此外,通过过表达Circ-0002570抑制了GC细胞中miR-587的表达,相反,Circ-0002570沉默促进了GC细胞中miR-587的表达。RIP实验检测也证实了Circ-0002570可以作为分子海绵竞争性吸附miR-587。4、数据库生物信息学分析结合荧光素酶活性测定实验证实VCAN是miR-587的下游靶点基因。在GC细胞中过表达miR-587后,VCAN不论是mRNA水平还是蛋白水平的表达情况均有所降低。这一调控情况也得到了Western blot检测的证实。挽救实验发现转染Circ-0002570-sh后对GC细胞中VCAN表达造成的抑制作用可以通过miR-587 inhibitor逆转。VCAN基因在GC组织中的表达显著增强,可作为预测患者预后不良的生物标志物。VCAN基因与多个肿瘤相关信号通路显著相关。本课题研究结果表明,Circ-0002570通过竞争性吸附miR-587增强VCAN基因的表达,进而促进GC恶性进程。结论:Circ-0002570在GC病理样本中显著高表达,且Circ-0002570高表达预示着GC患者预后不良。Circ-0002570通过竞争性吸附miR-587增强VCAN基因的表达,促进GC细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制GC细胞凋亡。本研究结果为GC的治疗提供了潜在的靶点。