【摘 要】
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目的:本研究通过在弱精子症精浆中分别添加ATP、透明质酸酶以及ATP+透明质酸酶,比较外源性添加ATP及透明质酸酶前后对精液质量影响,并通过透射电子显微镜观察精子细胞内的线粒体、顶体等超微结构的改变,结合前期课题组的研究,探讨外源性添加ATP及透明质酸酶对精液质量的影响。通过酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测AMP依赖蛋白激酶（A
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目的:本研究通过在弱精子症精浆中分别添加ATP、透明质酸酶以及ATP+透明质酸酶,比较外源性添加ATP及透明质酸酶前后对精液质量影响,并通过透射电子显微镜观察精子细胞内的线粒体、顶体等超微结构的改变,结合前期课题组的研究,探讨外源性添加ATP及透明质酸酶对精液质量的影响。通过酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测AMP依赖蛋白激酶（Adenosine5‘-monophosphate-activated protein kinase,AMPK）在弱精子症精浆中表达,探讨弱精子症精浆中AMPK的变化对精子的影响,寻找提高弱精子症精液质量的新思路。方法:（1）收取在右江民族医学院附属医院生殖中心男科门诊2019年11月至2020年5月就诊的患者,按照纳入标准后收集到103例符合实验条件的标本,通过SAC精液质量分析仪检测精液质量,每一份标本至少检测3次,精液质量正常42份,弱精子症61份,将检测后的每一份样本平均分为3组,每组100ul置于EP管中,并按1:1分别加入ATP、透明质酸酶以及ATP+透明质酸酶（ATP:透明质酸酶=1:1）,再次进行精液质量分析。（2）通过透射电子显微镜观察精子细胞内线粒体、顶体等超微结构的变化。（3）按纳入标准,收取在右江民族医学院附属医院生殖中心男科门诊2019年11月至2020年8月就诊的178例精液,其中弱精子症89例,正常精液89例,分别通过ELISA测定精浆中AMPK含量。结果:（1）精子前向运动（PR）:在弱精子症组、正常组中外源性添加ATP、透明质酸酶、ATP+透明质酸酶后,精子前向运动（PR）均减弱,P<0.05,差异具有统计学意义。添加ATP组与透明质酸酶组比较,外源性添加ATP后精子前向运动（PR）减弱,P<0.05,差异具有统计学意义;ATP组与ATP+透明质酸酶比较,外源性单独添加ATP酶导致精子前向运动（PR）减弱,P<0.05,差异具有统计学意义;添加透明质酸酶与ATP+透明质酸酶比较,精子前向运动（PR）无明显改变,P>0.05,差异无统计学意义。（2）精子总活力（PR+NP）:在弱精子症组、正常组中外源性添加ATP、透明质酸酶、ATP+透明质酸酶后,精子总活率（PR+NP）均减弱,P<0.05,差异具有统计学意义。添加ATP组与透明质酸酶组比较,外源性添加ATP后精子总活率（PR+NP）减弱,P<0.05,差异具有统计学意义;ATP组与ATP+透明质酸酶比较,外源性单独添加ATP酶导致精子总活率（PR+NP）减弱,P<0.05,差异具有统计学意义;添加透明质酸酶与ATP+透明质酸酶比较,精子总活率（PR+NP）无明显改变,P>0.05,差异无统计学意义。（3）透射电子显微镜:结果显示在弱精子症和正常精液中添加ATP、透明质酸酶和ATP+透明质酸酶后精子的超微结构改变的特点:精子不同程度水肿,细胞膜面积不同程度被破损、溶解,细胞器游离,整体呈崩解状态,头部呈不规则形小头。细胞核局部凹陷,染色质均匀,其中可见核泡,核膜模糊。顶体较小,结构模糊,致密区消失。精子尾部结构肿胀,线粒体肿胀,膜内基质局部变淡,嵴减少、消失,基质外溢;外周致密纤维粗细不均匀,结构模糊;双联微管数量减少,部分双联微管消失,亚微管结构消失;中央微管双微管结构模糊或消失。（4）精浆AMPK检测结果:弱精子症精浆中AMPK含量明显高于正常精浆AMPK含量,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）在弱精子症中外源性添加ATP、透明质酸酶、ATP+透明质酸酶后,精子前向运动（PR）以及精子总活力（PR+NP）均减弱;（2）在弱精子症中外源性添加ATP后,精子前向运动（PR）以及精子总活力（PR+NP）均减弱,且比外源性添加透明质酸酶、外源性添加ATP+透明质酸酶减弱更显著;（3）在弱精子症中外源性添加ATP、外源性添加透明质酸酶、外源性添加ATP+透明质酸酶,精子前向运动（PR）和精子总活力（PR+NP）减弱可能与精子超微结构改变及功能损害有关。（4）弱精子症精浆中存在AMPK,且弱精子症精浆中AMPK含量明显高于正常组。
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