论文部分内容阅读
基因表达的恰当、精确调控对于免疫应答整个过程的调节非常关键。T淋巴细胞的激活伴随着早期应答生长调节基因按特定模式的瞬时表达，这些基因编码转录因子、信号分子及细胞因子等，对于T细胞的免疫功能调节具有关键作用。前人的研究发现在T细胞激活的早期超过一半的转录组(transcriptomic)改变并不依赖于转录，而是由转录后水平mRNA稳定性的变化所引起。在能够调节mRNA稳定性的RNA-结合蛋白(RBP)中，HuR可能调控了那些3-非翻译区(3-UTR)中含AU-rich元件(ARE)并且编码参与T细胞激活调节的早期应答基因mRNA，因为核质穿梭蛋白HuR在T细胞激活的过程中能够快速、动态应答，而且当HuR-mRNA相互作用和HuR核质迁移被小分子化合物抑制后，T细胞的激活被完全阻断。但是影响T细胞激活早期事件的HuR-mRNA核糖核蛋白(mRNA ribonucleoprotein，mRNP)复合物的形成、以及转录后调控机制仍不清楚。 通过免疫沉淀的方法对T细胞激活早期关键调控时间点的HuR mRNP复合物分析，我们发现HuR和编码即早转录因子(immediate-early transcriptionfactor)的mRNA结合，其中包括早期生长应答(early growth response，Egr)基因家族成员的mRNA。这些含ARE的即早转录因子在T细胞激活的早期具有相同的瞬时表达特征，并调控关键免疫因子IL-2的表达。HuR和即早转录因子转录本之间mRNP复合物的形成与HuR在T细胞激活早期由核到胞质的快速迁移是同步的。利用报告基因系统分析表明Egr-1和Egr-3的mRNA在其3-UTR中含有转录后调控元件，介导报告基因表达的下调。Egr-1和Egr-3mRNA能够在体外与HuR蛋白结合，说明它们是受HuR调控的潜在靶mRNA，这也从另一方面说明其mRNA中含有ARE。细胞内的IP实验表明，Egr-1和Egr-3的mRNA在T细胞激活早期与内源HuR结合，这说明HuR通过mRNP复合物机制参与到这些功能相关蛋白的表达调控，通过对即早转录因子的调控来影响下游关键基因，如IL-2的激活。PI3K信号通路特异的抑制剂LY294002处理后，HuR在胞质中的分布明显增加，并且呈剂量-依赖性。而且，激活后的HuR由核到胞质的迁移以及[HuR-Egr] mRNP复合物的形成显著增强，Egr基因表达的上调幅度及Egr mRNA的稳定性得以增加。Egr转录因子表达的改变进一步影响到其下游关键基因的表达改变，如免疫调节因子IL-2的表达下调。 综上所述，我们的结果表明在T细胞激活早期的关键时间点，转录后调控因子HuR与即早转录因子Egr基因家族mRNA形成mRNP复合物，通过此关键分子机制，HuR调控了Egr-1和Egr-3等功能相关蛋白的瞬时表达，从而影响了这些转录因子调控下的早期应答基因级联激活，包括下游关键免疫调节因子IL-2的表达，阐明了HuR mRNP复合物作为调控中枢影响T细胞激活早期转录事件的重要作用。