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研究背景肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS)是最常见的一种功能性胃肠病,可分为便秘型(IBS-C)、腹泻型(IBS-D)、混合型(IBS-M)和不定型(IBS-U)。其发病机制复杂,其中IBS-C患者存在肠道动力、内脏高敏、脑-肠轴调节等多方面的异常。冰水灌胃大鼠模型可较好地模拟IBS-C中粪便性状、内脏敏感性的改变,肠神经系统(ENS)的变化可能在IBS发病中起一定作用。研究目的(1)通过制作结肠和回肠粘膜下神经丛和肌间神经丛铺片标本,采用免疫荧光双染法,分别对肠神经元总数以及ChAT. VIP、NOS和Calretinin免疫反应阳性神经元(以下简称阳性神经元)进行定量分析,评估IBS-C模型大鼠中上述不同功能神经元发生的变化,结合大鼠粪便性状和肠道功能的变化,推测其对肠道运动和分泌功能的影响。(2)检测IBS-C大鼠胃排空功能,采用免疫荧光双染法对其远端胃肌间神经丛ChAT、NOS阳性神经元进行定量分析,评估IBS-C模型大鼠胃神经元的变化及其对胃排空功能的影响。探讨ENS在IBS-C以及功能性胃肠病重叠症发病中的作用。材料与方法选用健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为冰水灌胃IBS-C组和对照组。观察大鼠粪便颗粒数、粪便含水量的变化以及胃肠道运动功能。制作大鼠回肠和结肠粘膜下神经丛及肌间神经丛铺片标本及远端胃切片标本,采用免疫荧光双染法分别检测肠道神经丛中ChAT、VIP、NOS和Calretinin阳性神经元和胃肌间神经丛ChAT和NOS阳性神经元,进行计数和定量分析。结果(1)冰水灌胃后,大鼠粪便颗粒数和含水量均减少,肠道传输功能无明显改变,但胃排空加快。(2)IBS-C模型大鼠回肠粘膜下神经丛ChAT阳性神经元比例(79.0±1.6%vs 82.9±2.5%,P=0.004)、每个神经节内ChAT阳性神经元数(3.0±0.5 vs 3.8±0.6,P=0.027)显著低于对照组；VIP阳性神经元比例(21.4±7.0%vs 35.7±9.2%,P=0.007)和每个神经节内VIP阳性神经元数(0.9±0.2 vs 1.3±0.2,P=0.003)、NOS阳性神经元比例(7.5±2.9% vs 16.2±6.1%,P=0.015)均显著低于对照组,表明回肠粘膜下神经丛分泌运动神经元减少；IBS-C组回肠肌间神经丛NOS阳性神经元比例显著高于对照组(34.0±4.8%vs 28.6±2.7%,P=0.028)。(3)IBS-C模型大鼠结肠粘膜下神经丛VIP阳性神经元比例(50.3±7.2%vs 61.3±5.0%,P=0.006)和NOS神经元比例(11.2±2.5%vs 14.9±3.3%,P=0.038)显著低于对照组；IBS-C组结肠肌间神经丛NOS阳性神经元比例显著高于对照组(30.9±5.9%vs 23.0±4.6%,P=0.015)。(4) IBS-C模型大鼠胃排空加快(89.0±7.0%vs 78.2±5.8%,P=0.016),胃肌间神经丛中ChAT阳性神经元比例高于对照组(79.0±2.4%vs 68.3±1.0%,P=0.029),NOS阳性神经元比例数低于对照组(18.9±5.0%vs 33.1±4.5%,P=0.000),提示胃排空加快可能与胃肌间神经丛兴奋性神经元增多、抑制性神经元减少有关。结论(1) IBS-C模型大鼠回肠和结肠粘膜下神经丛内VIP阳性分泌运动神经元减少,回肠粘膜下神经丛胆碱能神经元减少,提示粘膜下神经丛分泌运动神经元调控的分泌功能减弱可能在IBS-C的发病中发挥重要作用。IBS-C模型大鼠肠道肌间神经丛抑制性运动神经元(NOS阳性)增多,其对肠道肌肉运动的抑制作用加强,使肠道运动下降、传输减慢,导致便秘症状。(2) IBS-C组大鼠胃排空加快,远端胃肌间神经丛内ChAT神经元比例升高、NOS神经元比例下降可能与排空功能改变相关。应激可同时造成胃和肠道ENS的变化,影响胃肠道功能,在功能性胃肠病重叠症的发病中起重要作用。