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目的: 探讨巨噬素(Maresin,MaR1),一种主要由巨噬细胞产生的具有强大抗炎促消退作用的新型脂质介质,在小鼠脓毒血症模型(cecal ligation and puncture,CLP)中对其生存率、体内炎症因子表达、腹腔内炎症细胞及细菌含量、组织活性氧(ROS)和线粒体相关蛋白的影响,以及在人全血LPS体外模型中对ROS的作用,为临床脓毒血症的治疗提供一个新策略。 方法: 第一部分:选取25-30g雄性C57BL/6小鼠,在麻醉下施行盲肠结扎穿孔术(CLP),给予37℃生理盐水补液(5ml/100g),在保温毯上复温,制作脓毒血症的动物模型。共分为假手术组,CLP组,CLP后给巨噬素(100ng/mice),24h后取样本,通过血气分析观察血中乳酸表达;用ELISA测血浆中的炎症因子,肺组织中cAMP含量,检测SOD,CAT活性,ROS量;采用流式细胞术检测腹腔灌洗液中炎症细胞和细菌变化;HE染色分析重要器官组织形态学改变。同时,上述三组造模给药后均对其7内生存率进行记录检测。 第二部分:同样选取25-30g雄性C57BL/6小鼠,分为CLP组,CLP后给巨噬素组(100ng/mice),CLP后给巨噬素和BOC-2组或CLP后给巨噬素和SQ22536组,术后24h后取动脉血观察乳酸表达,用ELISA测血浆中的炎症因子TNF-α和肺组织中cAMP含量,光镜下观察肺组织病理学变化,检测肺组织内SOD,CAT活性,ROS量,测定肺组织中线粒体内相关蛋白量。 第三部分:采取健康志愿者和sepsis病人外周静脉全血,以1∶1的体积比例加入培养基RPMI-1640,含10%胎牛血清,加入LPS100ng/ml,置于细胞培养箱中共同培养6h,制作内毒素性脓毒血症体外模型。分为空白对照组(Con)、LPS组、LPS+巨噬素组、LPS+M+BOC-2组、LPS+M+SQ22536组。回收血液,分离血浆检测SOD、NOX活性,检测全血细胞内ROS含量。 结果: 1.在活体实验中,与假手术组相比,CLP术后7天生存率明显降低,术后24h,小鼠血浆内的炎症因子TNF-α,MPO等迅速上升,腹腔内细菌含量急剧升高,肺组织切片有病理学改变,乳酸值明显提高。 2.CLP术后给予巨噬素治疗组较CLP组,上述炎症损伤表现有明显改善,生存率升高(P<0.01);炎症因子也明显下降,腹腔内细菌数也有所减少,巨噬细胞/中性粒细胞值升高;乳酸和ROS的体内含量也下调了。这些指标相比假手术组,只有小幅度上升,差异无统计学意义。 3.在术后给予巨噬素治疗后又给予BOC-2(脂氧素受体抑制剂,600ug/kg)或SQ22536(cAMP抑制剂,10mg/kg)后,巨噬素的治疗作用消失,脓毒血症中重要指标血乳酸含量明显上升,线粒体呼吸链相关酶SDHA、ATP5A及线粒体功能蛋白ClpP等都减少了。 4.在人外周血LPS刺激模型和脓毒血症病人外周静脉血中,巨噬素治疗组ROS含量均显著降低,而同时给予BOC-2(10uM)和SQ22536(20M)后废除了此现象。对于ROS代谢酶活性,巨噬素是NOX活性减弱而水解酶SOD,CAT活性增高;阻滞剂BOC-2(10uM)和SQ22536(20M)的加入,使NOX,SOD活性与脓毒血症组相比没有统计学差异。 结论: 巨噬素可以通过脂氧素A4受体(ALX)-cAMP信号通路影响ROS相关代谢酶活性,以及线粒体氧化呼吸链复合酶含量而减少ROS的产生;降低乳酸含量,减少体内炎症因子:IL-1β、TNF-α、MPO、MIP2的产生及细菌定植,升高腹腔内巨噬细胞/中性粒细胞比值,改善肺组织形态学变化,最终提高脓毒血症小鼠的生存率。在体外细胞模型中巨噬素也可调节ROS代谢酶的活性从而降低人外周血细胞中ROS的量。(d5)-DHA来源的巨噬素可作为治疗脓毒血症的新型治疗措施。