周氏克金岩方抗肺癌A549细胞有效组分的研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yummyumi
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本论文以中药复方有效组分的系统生物学评价为依据,选用周氏克金岩方,以非小细胞肺痛为病理模型,选用MTT法,在细胞水平上初步筛选周氏方的有效部位和有效组分,并采用流式细胞实验、克隆形成实验等对筛选出的有效部位和有效组分进行深入研究。再对筛选出的有效组分进行成分分析,明确周氏克金方的抗肺痛细胞毒作用的有效物质基础。   本论文主要研究内容如下:   首先,采用肺癌A549细胞MTT实验,优选周氏克金岩方的最佳提取溶剂和最佳煎煮方式,确定周氏方的最佳提取方式。   其次,对周氏方进行系统部位的分离,制备系统部位供试品。采用肺癌A549细胞MTT实验,筛选出周氏方的有效部位,在此基础上进一步采用流式细胞实验、荧光染色实验和克隆形成实验对有效部位进行深入研究,研究有效部位对肺癌A549细胞的细胞周期、细胞形态的影响,在细胞水平上探讨有效部位抗肺癌细胞毒作用机制。   再次,对筛选出的有效部位再进行系统的分离,制备不同组分。采用MTT实验,筛选出有效部位中的有效组分,在此基础上再采用流式细胞实验、荧光染色实验和克隆形成实验,研究自效组分对肺癌A549细胞的细胞周期、细胞形态和细胞增值的影响,在细胞水平上探讨有效组分抗肺痛细胞毒作用机制。   最后,研究有效组分的成分特征。对筛选出的有效组分E9进行定性分析,建立E9组分的指纹图谱,确定共有峰;再对共有峰进行组方药归属分析及HPLC/MS/MS分析;对有效组分N3进行定性分析、定量分析和纯度分析,在此基础上进一步分离纯化,然后再对纯化后的主要级分N3-3进行纯度分析和分子量测定及其单糖、氨基酸组成和结构分析。   周氏方有明显体外抗肺痛活性,现已筛选出两个活性突出的有效组分E9和N3:   (1)E9组分有21个共有峰,其中1、5、8、9号峰来自于红花,10号峰来自于鱼腥草,13号峰来自于仙鹤草,15号峰来自于金荞麦;利用HPLC-MS/MS已分析出有机酸类成分有没食子酸、莽草酸、棕榈酸等。   (2)N3组分有三个大分子成分组成,其中主要成分N3-3为糖蛋白,分子量为8171,多糖部分由鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖组成,含量为88.55%,蛋白部分由天门冬氨基酸、苏氨酸、丝氨酸等九种氨基酸组成,含量为8.43%。
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