【摘 要】
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目的:后发性白内障是白内障手术引发的并发症,对患者术后视觉质量造成干扰,目前尚无有效的治疗药物。尽管对该现象发生的机制尚不明确,但当前大量的研究认为术后生长因子及炎性因子等的聚积导致晶状体上皮细胞发生上皮间充质转换（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）是该现象发生的主要机制。二甲双胍（Metformin,Met）是一线降糖药,近年来发现其在抗衰老、抗肿瘤及抗
【基金项目】
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国家自然科学基金（81870644）；
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目的:后发性白内障是白内障手术引发的并发症,对患者术后视觉质量造成干扰,目前尚无有效的治疗药物。尽管对该现象发生的机制尚不明确,但当前大量的研究认为术后生长因子及炎性因子等的聚积导致晶状体上皮细胞发生上皮间充质转换（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）是该现象发生的主要机制。二甲双胍（Metformin,Met）是一线降糖药,近年来发现其在抗衰老、抗肿瘤及抗纤维化研究中起效,但目前尚无Met在PCO的研究。Met主要通过诱导细胞发生自噬、抑制细胞增殖以及抑制迁移等发挥作用,自噬是降解细胞产物及细胞器的生物学过程,自噬功能异常与PCO的发病之间存在联系,但自噬与晶状体上皮细胞EMT之间尚无确切报道。文以TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞发生EMT作为PCO体外模型,探索Met对人晶状体上皮细胞发挥的功能及其可能的机制,为PCO的药物治疗提供可能性。方法:晶状体上皮细胞系SRA01/04根据处理条件不同分成正常对照组、TGF-β2处理组、Met处理组、Met联合TGF-β2处理组、自噬抑制剂组。其中,TGF-β2处理晶状体上皮细胞24 h作为TGF-β2处理组;不同浓度Met处理晶状体上皮细胞24～72 h作为Met处理组;在TGF-β2处理前提下加入Met（2.5、5、10m M）作用24 h作为Met联合TGF-β2处理组;采用5m M 3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）提前处理2 h或10μM氯喹（Chloroquine,CQ）处理24 h,分别对发生自噬的组别进行抑制作为自噬抑制组。通过细胞计数试剂盒-8（Cell counting kit-8,CCK-8）检测Met处理不同浓度和不同时间对晶状体上皮细胞增殖水平的影响;采用划痕实验和Transwell迁移试验检测晶状体上皮细胞在各处理因素下迁移能力的变化情况;采用RT-q PCR测定各处理组EMT标记物（E-cad,Vimentin和α-SMA）的转录本表达变化情况;采用Western blot检测各处理组EMT标记物（E-cad,Vimentin和α-SMA）及自噬标记物（LC-3B,p62）的蛋白表达情况。结果:1、与正常对照组相比,划痕实验和Transwell迁移试验证实（10、50ng/m L）TGF-β2处理可诱导晶状体上皮细胞发生迁移,结果均有统计学意义;通过RT-q PCR和Western blot检测证实,与对照组相比,10、50ng/m L TGF-β2处理可降低上皮间充质转化标记物E-cad的转录本和蛋白表达,诱导间充质标记物Vimentin,α-SMA的转录本表达和蛋白表达上调,证实10ng/m L TGF-β2可建立PCO的体外细胞模型;2、通过CCK-8实验证实Met在1.25～20m M浓度处理24～72 h可剂量依赖性及时间依赖性降低晶状体上皮细胞增殖能力;3、通过划痕实验和Transwell迁移试验证实Met（2.5～10m M）可浓度依赖性降低TGF-β2诱导上调的晶状体上皮细胞迁移能力,通过RT-q PCR和Western blot检测Met可抑制TGF-β2诱导下调的Ecad的转录本和蛋白表达,还能抑制TGF-β2诱导上调的Vimentin及α-SMA的转录本和蛋白表达,证实Met可抑制TGF-β2诱导上调的EMT;4、通过Western blot检测自噬标记物,发现Met联合处理组可以诱导自噬,通过3-MA及CQ对Met诱导的自噬进行抑制,可以回复Met对迁移和EMT的抑制作用,证明Met通过提高自噬水平抑制TGF-β2诱导上调的晶状体上皮细胞迁移能力和EMT。结论:本研究首次发现Met可抑制TGF-β2诱导上调的人晶状体上皮细胞迁移能力和EMT,通过自噬抑制剂回复后发现,Met可能通过提高自噬发挥抑制迁移和EMT的作用。
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