研究背景肝癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是一种发病率高、死亡率高的常见恶性肿瘤。去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）是通过人工合成的升高白细胞活性的抗肿瘤药。干扰素刺激基因15（Interferon stimulated gene15,ISG15）是一种干扰素（interferons,IFNs）诱导的泛素样蛋白,在病毒或细菌感染时高度诱导其表达。ISG15在多种肿瘤细胞中呈高表达,它有助于肿瘤的侵袭和转移,并使肿瘤对抗肿瘤药物产生耐药性。本研究旨在检测ISG15在肝癌组织和细胞中的表达差异,并探讨肝癌患者ISG15 水平的临床病理意义,研究ISG15基因在体内外对肝癌去甲斑螯素敏感性的影响及其作用机制,为促进去甲斑蝥素在肝癌中的安全应用提供新思路。研究方法在本研究中,我们通过qRT-PCR和免疫组化对肝癌患者的肿瘤组织和相配对的癌旁正常组织中ISG15的表达水平进行了检测。肝癌细胞系（Hep3B、MHCC-97H、MHCC-97L、Huh7）和正常肝细胞系（LO2）中ISG15的mRNA水平通过qRT-PCR进行了测定。实验涉及到的37例肝癌患者按肿瘤组织中ISG15水平中位值分为低ISG15组（15例）和高ISG15组（22例）,随后我们对HCC组织中ISG15水平与肿瘤大小、TNM分期、分化程度等进行了相关性分析。我们构建了 ISG15稳定干扰质粒和稳定过表达质粒,分别对肝癌细胞株Hep3B、Huh7进行转染,qRT-PCR和蛋白质印迹法（western blot,WB）检测转染效率。使用去甲斑螯素处理细胞,干扰实验分组为siNC,siISG15,siNC+norcantharidin 和 siISG15+norcantharidin,过表达实验分组为 NC,ISG15,NC+norcantharidin和ISG15+norcantharidin,随后通过CCK8、细胞克隆形成实验检测细胞增殖和克隆能力,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡情况。采用western blot检测肝癌细胞凋亡相关蛋白在ISG15干扰或过表达的肝癌细胞株中的表达水平。为了研究ISG15在体内对于肝癌去甲斑螯素敏感性的影响,我们构建了肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,接种转染ISG干扰质粒的肝癌细胞系Huh7,并使用去甲斑螯素处理,动物实验分组为 siNC,siISG15,siNC+norcantharidin 和 siISG15+norcantharidin。Tunel 实验检测移植瘤组织中细胞凋亡情况。免疫组化实验检测移植瘤切片组织中Ki-67增殖指数的表达。研究结果我们的实验数据表明ISG15在肝癌患者肿瘤组织和细胞系中的表达水平显著高于正常组织和正常肝细胞,且HCC组织中ISG15水平与肿瘤大小、TNM分期、分化程度呈正相关。siISG15和ISG15质粒分别在肝癌细胞Huh7和Hep3B中成功转染,实验结果显示siISG15显著下调了 Huh7细胞中ISG15的表达水平,同时ISG15显著上调了 Hep3B细胞中ISG15的表达水平。siISG15转染和去甲斑螯素处理能够显著抑制细胞增殖和克隆形成和细胞活力,并且能够明显诱导Huh7细胞凋亡。去甲斑螯素处理可以显著减少细胞增殖和克隆,诱导细胞凋亡,ISG15过表达处理肝癌细胞逆转了这些现象。此外,ISG15下调明显增强了去甲斑蝥素对肝癌细胞凋亡相关蛋白表达的影响,而ISG15过表达显著抑制了去甲斑蝥素对肝癌细胞凋亡相关蛋白表达的调节作用。在体内实验中,我们的实验数据显示siISG15,siNC+norcantharidin和siISG15+norcantharidin三种处理均可以促进肝癌细胞凋亡。siISG15,siNC+norcantharidin和siISG15+norcantharidin三种处理中Ki-67的表达均显著低于对照组siNC。结论本研究发现了 ISG15在肝癌组织及细胞中表达上调,并可能是肝癌的致癌基因,与肝癌患者的肿瘤大小、TNM分期、分化程度呈正相关。下调ISG15基因可促进去甲斑蝥素对Huh7细胞的抗肿瘤作用,ISG15过表达逆转去甲斑蝥素对Hep3B细胞增殖和凋亡的影响。ISG15可以通过影响肝癌细胞凋亡调节肝癌细胞对去甲斑螯素的敏感性。在体内敲除ISG15基因能够抑制肝癌组织的形成和生长,促进凋亡,增加肝癌细胞对于去甲斑螯素质粒的敏感度。本研究对于去甲斑蝥素在肝癌中的安全应用具有理论指导意义。