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因创伤、肿瘤、骨质疏松等造成的骨不连、骨缺损等一直是骨科医师需要解决的难题,骨组织工程学的长足发展有望在未来攻克这一问题。任何骨组织工程骨构建均由种子细胞、培养环境与支架材料组成。骨髓间充质干细胞（BMSCs）,是来源于中胚层的一类干细胞,其在体外具有较大的可增殖能力和可多方向分化潜能,存在于骨髓内并具有明显的贴壁能力,可分化为成骨、心肌、脂肪等多种细胞。其在骨代谢调节中起着较为关键的作用。机体增加和维持骨量的细胞来源主要为BMSCs分化成的成骨细胞,是人体骨骼维持健康的重要因素。BMSCs比较容易获得,体外扩增后仍无免疫原性,且易转染外缘性基因并能长期传代表达。另外,应用BMSCs进行自体的移植实验和治疗时几乎不受伦理学限制。体外BMSCs的增殖分化可以受多因素的准确调控,因此它一致被视为移植实验和治疗首选的干细胞。绝经后妇女骨质疏松发病率明显升高,绝经后机体内雌激素水平迅速下降是主要原因,激素替代疗法（HRT）是该病最经典的治疗方案,17β-雌二醇能促进BMSCs成骨分化,且体外浓度在10-9 mol/L时作用最为显著。随着祖国医学的不断发展进步,由于“补肾壮骨”中药在临床治疗骨质疏松、骨不连等有明显的疗效。淫羊藿苷可提高碱性磷酸酶（ALP）活性,增加钙化结节和碱性磷酸酶阳性克隆数（CFU-FALP）数量,促进成纤维细胞生长因子（b FGF）,类胰岛素一号增长因子（IGF-1）的表达,且淫羊藿苷可双向调节对BMSCs的分化,即促进BMSCs成骨性分化的同时又抑制了BMSCs成脂分化。但长期应用雌激素的副作用较为显著以及淫羊藿等中药的作用又相对迟缓,因此本实验通过研究西药成分17β-雌二醇联合中药淫羊藿提取物淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化诱导的作用是否有协同作用,在降低药量的同时提高骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化效率,为临床用药提供理论依据。本实验所需的BMSCs均提取于3周龄大小的清洁级SD大鼠的长骨骨髓,运用全骨髓贴壁法进行培养。镜下可见初分离的大鼠骨髓悬液细胞密集,12 h后细胞开始贴壁,部分细胞形态伸展、体积增大,贴附于瓶壁,72 h可见部分细胞伸出突起,突起圆钝而光滑,细胞呈梭形、菱形或多边形,核大而饱满,外观似成纤维细胞样。培养14d后,细胞融合成片,分界变得较为模糊,胞体增大,形态则变为短梭形和不规则形,部分细胞聚集成灶,21 d天后观察诱导细胞部分出现散在的矿化结节,其中心透光度较差。既有研究表明:BMSCs可表达CD29、CD50、CD90等间充质细胞系及内皮细胞系的表面抗原,而不表达CD14、CD45等造血细胞系表面抗原。本研究运用流式细胞仪对BMSCs联合表面抗原进行鉴定,鉴定结果显示,细胞表面抗原CD45阳性表达率为0.5%,细胞表面抗原CD29阳性表达率99.6%,细胞表面抗原CD90阳性表达率99.7%。其结果符合大鼠骨髓间充质干细胞特征。取第4代BMSCs,消化后调整细胞密度至1×104/ml,接种于25ml培养瓶中,将培养细胞分为对照组（C、组）、17β-雌二醇作用组（A组）、淫羊藿苷组（B组）、联合诱导组（A+B组）。第4代BMSCs培养24h后进行定向诱导,C组加入基础诱导剂(地塞米松1×10-8mol/L、β-甘油磷酸钠1×10-2mol/L、抗坏血酸5×10-2g/L),A组加入基础成骨诱导剂和17β-雌二醇1×10-9mol/L,B组加入基础成骨诱导剂及淫羊藿苷1×10-4mol/L,A+B组加入基础成骨诱导剂、17β-雌二醇1×10-9mol/L及淫羊藿苷1×10-4mol/L。持续诱导21天,隔天半量换液,7天传代。将BMSCs以1×104个/ml接种到培养瓶中,按上述实验分组进行成骨诱导,各组细胞于成骨诱导第7天进行ALP活性测定,各组细胞于成骨诱导第14天进行COL-1相对浓度测定,各组细胞于成骨诱导第21天进行BGP浓度测定,各组细胞分别于成骨诱导第21天进行茜素红钙结节染色。结果显示分别检测到ALP、COL-1、BGP相对浓度为联合组大于单因素诱导组,且单因素诱导组大于对照组,钙结节计数为联合组大于各单因素诱导组,各单因素诱导组均大于对照组,差别有统计学意义经本实验,能够说明:第一、17β-雌二醇和中药有效成分淫羊藿苷均可单独诱导BMSCs体外分化为骨样细胞;第二、二者联合诱导的效果优于各自单独诱导。