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目的:探讨研究早期集束化治疗对脓毒症大鼠肠道微生态的影响,以及与脓毒症大鼠机体和肠道免疫功能的变化之间的相关性,揭示早期集束化治疗脓毒症的疗效机理,为阐明脓毒症的发生发展的机理提供理论依据,为探索脓毒症的诊断和治疗方案的优化奠定基础。 材料与方法:随机将80只(200-250g)SD雄性大鼠分成5组:假手术组(sham),脓毒症组(CLP),早期集束化治疗组 (imipenem+NS组) ,环磷酰胺组(CTX),早期集束化治疗联合环磷酰胺组(imipenem+NS+CTX组)。采用盲肠结扎穿孔术(Cecal Ligation and Puncture,CLP)复制SD大鼠脓毒症模型。假手术组给予同样的手术操作,但不进行穿孔及结扎。判断和鉴定脓毒症模型复制成功后,通过腹腔注射生理盐水(35ml/kg)、亚胺培南(120mg/Kg)及环磷酰胺(10mg/kg)干预治疗。记录各组大鼠存活时间和数量,并绘制生存曲线,定量分析各组大鼠生存率。通过荧光示踪法检测各组大鼠门静脉血中FD-70浓度,定量分析各组大鼠肠道通透性。通过HE染色各组大鼠空肠组织切片,观察各组大鼠肠壁组织损伤;并利用TUNEL法,定性及定量分析肠道黏膜细胞凋亡水平,通过蛋白印迹技术(Western-blot技术),检测各组大鼠结肠组织紧密连接蛋白(occludin)表达水平,探讨分析细胞间通透性改变。通过ELISA法,检测血浆中炎症因子(IL-6,IL-10,TNF-α)的表达水平,分析炎症因子对肠道通透性的影响。 结果:1. 成功复制脓毒症模型;2. 观察各组大鼠7天生存率,其中CLP组、imipenem+NS组、imipenem+NS+CTX组的生存率分别为0%、50%、70%。其中imipenem+NS+CTX组可明显提高SD大鼠生存率。差异具有统计学意义(p<0.05);3. 通过病理切片HE染色观察肠壁组织病理损伤情况、TUNEL法检测肠粘膜上皮细胞凋亡水平。结果显示:CLP组大鼠肠粘膜损伤及上皮细胞凋亡最为明显,其它治疗组肠粘膜损伤及肠上皮细胞凋亡均有不同程度改善;与CLP组相比,imipenem+NS组和imipenem+NS+CTX组的肠粘膜损伤程度及肠上皮细胞凋亡水平明显降低,差异具有统计学意义(p<0.05); 4. Western-blot技术检测肠组织occlucin蛋白表达水平、荧光显色法检测血浆中FD-70水平,评估肠壁通透性变化情况。结果显示:CLP组occludin蛋白表达量明显下调,血浆中FD-70水平明显升高,肠壁通透性明显增加,imipenem+NS组和imipenem+NS+CTX组中occludin蛋白表达量均有不同程度的上调,血浆中FD-70水平较明显降低,肠壁通透性明显降低。差异具有统计学意义(p<0.05);5.炎症因子可以反映机体的免疫功能,同时也可影响肠壁组织通透性。结果显示:CLP组TNF-α、IL-6血浆水平明显升高;imipenem+NS组和imipenem+NS+CTX组中,与CLP组相比,TNF-α、IL-6在血浆水平有不同程度下降;CLP组和imipenem+NS组IL-10的水平较sham组明显升高,imipenem+NS+CTX组IL-10的血浆水平下降,差异具有统计学意义(p<0.05)。 结论: 1.早期集束化治疗可改善脓毒症大鼠早期生存率,早期集束化治疗联合小剂量环磷酰胺治疗明显提高脓毒症大鼠生存率。 2.早期集束化治疗对脓毒症大鼠肠道黏膜屏障损伤有保护作用。早期集束化治疗联合小剂量环磷酰胺治疗可有效减轻脓毒症大鼠肠道黏膜屏障的损伤,与脓毒症大鼠肠道免疫功能变化相关。