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目的:通过检测大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,Ang Ⅱ)、血管紧张素Ⅰ转换酶(Angiotensin Ⅰ coriverting enzyme,ACE)及血管紧张素Ⅱ受体AT1和AT2表达的时相性变化和组织细胞定位,阐明AngⅡ、ACE及AT1和AT2在皮肤创面愈合过程中的表达规律。
方法:建立大鼠背部全层皮肤缺损模型,采用HE染色观察不同时间点皮肤组织结构及特征,用免疫组织化学方法检测皮肤创面愈合过程中AngⅡ、ACE、AT1及AT2表达的时相性变化及组织细胞定位。采用RT-PCR法检测ACE、AT1及AT2基因表达水平的变化。
结果:
1.大体观察:创面面积随伤后时间延长而逐渐缩小,到伤后21d几乎所有创面完全愈合。
2.光镜下观察伤后不同时间点皮肤组织结构及特征,结果如下:伤后第3d有少量肉芽组织形成;到伤后第7d肉芽组织增厚,新生毛细血管丰富,有少量炎性细胞,成纤维细胞较多;伤后第14d可见大量的肉芽组织生长,胶原沉积增多,上皮覆盖增加,炎性细胞减少。伤后第21d所有创面均被新生上皮覆盖,创面已经完全愈合,炎性细胞和新生血管减少。
3.免疫组织化学染色结果显示,大鼠正常皮肤有.AngⅡ、ACE、AT1、AT2的表达,但表达量少。在正常皮肤AngⅡ主要定位于表皮及毛囊外根鞘,而ACE、AT1、AT2等定位于毛囊外根鞘和皮脂腺,表皮层未见阳性染色。在大鼠创面愈合过程中AngⅡ主要在新生血管壁和新生上皮有表达,伤后3d其表达减弱,伤后7d恢复到正常水平,伤后14d达高峰,伤后21d创面几乎完全愈合,AngⅡ表达恢复到正常水平。在创面愈合过程中ACE、AT1、AT2除了新生血管壁以外,其余部位未见阳性染色,在此过程中三者表达变化基本一致,即伤后7天开始表达明显增加,伤后14d达高峰,伤后21d恢复到接近正常水平。
4.RT-PCR结果显示在正常皮肤和损伤后的皮肤组织中均有AT1、AT2及ACE基因mRNA表达。在伤后3dAT1、AT2及ACE基因表达逐渐增加,伤后14d达高峰,与正常皮肤中的表达相比差异有显著性(P<0.05)。伤后21d创面几乎完全愈合,AT2及ACE基因表达明显减弱,但AT1表达仍高于正常皮肤表达。
结论:
1.大鼠皮肤组织损伤愈合过程中AngⅡ、AT1、AT2及ACE表达规律为:蛋白水平上,伤后3d表达减弱,伤后7d恢复到正常水平或开始增加,第14d达峰值,第21d恢复到正常水平;基因水平上,伤后3d开始增加,伤后14d达峰值,第21d恢复到正常水平或仍高于正常水平。
2.AngⅡ可能通过AT1、AT2受体参与大鼠全层皮肤损伤愈合过程。