论文部分内容阅读
目的：既往研究发现大鼠眼前房内壁存在机械感受性三叉神经末梢，瞬态电压感受器阳离子通道A1（TRPA1）在胞膜起机电转换作用，可能在眼压神经性反馈调节中发挥眼压感受器的功能。大麻素（Cannabinoid）兼具降眼压作用和TRPA1激动剂作用，还是临床常用降眼压药物贝美前列腺素（Bimatoprost）的前体。二药降眼压机制尚不明确，推测贝美前列腺素和大麻素一样具有TRPA1激动作用，二药通过激活 TRPA1增敏机械感受性三叉神经末梢，从而发挥降眼压作用。为验证上述假说，本研究在离体细胞上进行了初步的探索。 方法：应用钙影像技术，在转染了带Human TRPA1（hTRPA1）质粒、能稳定表达TRPA1通道的HEK293细胞（即稳定表达hTRPA1的HEK293细胞，hTRPA1 HEK293 cells）上及急性分离的三叉神经元胞体上验证贝美前列腺素、大麻素对TRPA1的激动作用。逆向示踪剂Dil注入大鼠眼前房内，以标记支配大鼠前房内壁的三叉神经元胞体。应用全细胞膜片钳技术在Dil标记的三叉神经元上验证贝美前列腺素和大麻素对TRPA1离子通道的激活效应。细胞外液喷射法对Dil标记的三叉神经元胞体施加机械刺激，运用全细胞膜片钳记录机械敏感性电流，验证贝美前列腺素通过激活 TRPA1通道增敏支配大鼠眼前房内壁三叉神经元机械敏感性。 结果：贝美前列腺素在稳定表达hTRPA1的HEK293细胞上能激发钙内流，在转染了不带hTRPA1质粒、不表达TRPA1通道蛋白的HEK293细胞（即不表达hTRPA1的HEK293细胞，nt-TRPA1HEK293 cells）上不能激发钙内流。贝美前列腺素和大麻素在急性分离培养的三叉神经细胞上能激发钙内流，钙内流能够被TRP家族阻断剂钌红（RR）和TRPA1特异性阻断剂HC-030031显著抑制。贝美前列腺素和大麻素能激发Dil标记的三叉神经元产生内向电流，该电流能被HC-030031显著抑制。贝美前列腺还能显著增强Dil标记三叉神经元机械敏感性电流，这种效应也能被HC-030031显著抑制。 Dil标记的三叉神经元产生内向电流，该电流能被HC-030031显著抑制。贝美前列腺还能显著增强Dil标记三叉神经元机械敏感性电流，这种效应也能被HC-030031显著抑制。 结论：贝美前列腺素和大麻素一样是 TRPA1的激动剂，二者均能激活支配大鼠眼前房内壁三叉神经元胞膜上TRPA1通道，贝美前列腺素能够通过激活TRPA1通道增敏大鼠眼前房内壁三叉神经末梢机械敏感性，大麻素是否具有同样功能尚在研究中。