鸡胚性腺的发育具有二态性,即雌雄鸡胚性腺发育不相同,雄性鸡胚双侧性腺发育为睾丸,而雌性鸡胚性腺右侧发生退化,左侧性腺发育为卵巢。这一生物过程是由许多生物因子共同作用的结果,但其具体机制还未见报道。miR-199a是具有调控细胞增殖凋亡作用的miRNA,然而有关gga-miR-199a是否在鸡胚性腺发育中起作用的研究并不多,主要是由于可用于体外研究基因功能的鸡细胞系较少,且鸡细胞培养对温度和血清的要求比较高,因此不易于开展相关研究。为探究gga-miR-199a在鸡性腺发育过程中的作用,本研究分离不同胚龄的鸡胚性腺,检测其gga-miR-199a的表达量在不同性别鸡胚左右性腺中随胚龄的变化。同时构建了过表达gga-miR-199a的慢病毒系统,用于在鸡细胞系和原代细胞研究gga-miR-199a对鸡细胞的影响,为其在活体上研究gga-miR-199a对鸡性腺发育的影响提供基础工具。研究结果如下:1.为了探究gga-miR-199a在鸡胚性腺发育中的作用,本研究分离了鸡胚不同胚龄,不同性别的左右性腺,通过RT-q PCR检测gga-miR-199a和其靶基因的表达量。结果表明,雌雄胚胎右侧性腺的增殖或退化可能与gga-miR-199a表达量相关,且发育相关基因HIF1和Smad1可能作为gga-miR-199a的靶基因参与鸡胚性腺发育的调控过程,表明gga-miR-199a在雌雄鸡胚性腺发育中起到一定作用。2.成功构建了过表达gga-miR-199a的慢病毒系统,通过侵染HEK293T细胞,成功获得稳定持续过表达gga-miR-199a的细胞系。并通过RT-q PCR检测gga-miR-199a表达量增加191.76倍以上。通过转录组测序筛选到699个差异表达基因,这些差异基因被GO和KEGG富集到34项生物学过程13个相关信号通路。表明gga-miR-199a的过表达可成功影响细胞内的生物学过程。3.利用该慢病毒过表达系统,在鸡DF-1细胞系和鸡胚原代细胞中过表达gga-miR-199a,得到稳定持续过表达gga-miR-199a的DF-1细胞系,RT-q PCR检测DF-1细胞系和鸡胚原代细胞中gga-miR-199a及其靶基因HIF1α表达量,结果表明在DF-1细胞系中,gga-miR-199a表达量极显著提高,其靶基因HIF1α表达量显著降低;在鸡胚原代细胞中,gga-miR-199a及其靶基因HIF1α表达量存在提高和降低的趋势。综上所述,gga-miR-199a在鸡胚性腺发育过程中通过调控与生长发育相关的靶基因而起到一定调控作用,其调控的具体机制还需进一步研究。本研究通过构建过表达gga-miR-199a慢病毒系统,在鸡DF-1细胞和鸡胚原代细胞中成功稳定持续过表达gga-miR-199a,为在胚胎中研究gga-miR-199a对性腺发育影响提供基础工具。