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研究背景和目标：
随着生活习惯和饮食结构的改变,我国结直肠癌发病率高,且呈逐年上升的趋势,严重威胁着人类身体健康。作为一种复杂疾病,结直肠癌的发生发展受到遗传因素与环境因素的共同调控。随着关于LATS家族的相关研究的逐渐深入,人们对LATS家族在肿瘤调控,调节细胞增殖、诱导凋亡与衰老,转录调控、细胞迁移等方面发挥作用的认识也逐步加深;microRNAs是一类长度为19-25个核苷酸的非编码小分子RNA,主要通过与靶基因mRNA3’非翻译区的完全或不完全匹配,降解靶基因的mRNA或抑制其翻译,从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动。大量研究表明,miRNAs发挥着类似于原癌基因或肿瘤抑制基因的功能。
本研究采用免疫组织化学技术、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、Westernblot等方法检测LATS2与miRNA-373在大肠癌及癌旁组织中的表达及分布,探讨LATS2与miRNA-373在结直肠肠癌生长、转移中可能的机制及作用。
对象与方法：
一、研究对象
97例结直肠癌标本及30例正常组织标本收集自中国医科大学附属盛京医院病理科2010-2011年存档蜡块。所有病例术前未接受放疗和化疗。男性57例,女性40例;年龄38-94岁(中位年龄61岁).按照UICC制定的肿瘤TNM分期标准:Ⅰ期+Ⅱ期65例,Ⅲ期+Ⅳ期32例:组织学分级高中低分化级分别为27例、56例及14例。
为了验证免疫组化结果,我们另外收集了30例新鲜结直肠癌及最远端切缘的肠粘膜组织(术后病理予以证实)用于检测miR-373与LATS2mRNA的表达情况以及LATS2蛋白的表达情况。
二、实验方法
1、应用免疫组织化学方法检测LATS2在97例结直肠癌标本及30例正常组织蜡块中的表达情况
2、采用RT-PCR技术,检测30例新鲜结直肠癌及最远端切缘的肠粘膜组织(术后病理予以证实)中miR-373与LATS2mRNA的表达情况。
3、采用WesternBlot技术,检测活体结直肠癌及最远端切缘的肠粘膜组织(术后病理予以证实)中LATS2蛋白的表达情况。
4、所有统计学运算由SPSS17.0forwindows软件完成,免疫组织化学计数资料组间及组内比较采用X2检验,P＜0.05为差异有统计学意义。RT-PCR及Westernblot计量资料用(-x±s),P＜0.05表示差异有统计学意义。
结果：
1、免疫组织化学显示97例结直肠癌组织中LATS2蛋白表达阳性率为36.1%(35/97),明显低于正常组织的63.3%(19/30),X2=6.962,P=0.008。其表达与患者年龄,肿瘤位置,结直肠癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期未见明显相关。
2、利用RT-PCR技术半定量比较各种组织LATS2mRNA水平,其中癌组织与癌旁正常组织具有显著差异(0.90±0.12vs1.56±0.14)(P＜0.05)。
3、利用RT-PCR技术半定量比较各种组织miRNA-373水平,其中癌组织与癌旁正常组织具有显著差异(1.01±0.10vs0.65±0.05)(P＜0.05)
4、通过WesternBlot及灰度扫描发现:癌旁正常组织组中LATS2表达明显低于癌组
结论：
1、LATS2在结直肠癌中存在低表达;为潜在的抑癌基因,其表达情况与结直肠癌临床病理因素未见明显相关。
2、miR-373在结直肠癌新鲜组织中的表达高于正常结直肠组织中表达。
3、LATS2与miR-373在结直肠癌中的表达可能对揭露结直肠癌生长、转移机制发挥重要作用