哈茨木霉T88 perg-22基因的功能研究

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利用木霉菌作为生物农药来防治各种病原真菌已经在全世界范围内引起研究者们越来越大的兴趣。本论文以哈茨木霉T88为研究对象,采用RT-PCR和PCR获得了哈茨木霉T88perg-22基因的全部编码序列,该基因编码616个氨基酸,理论分子量为155.5kD。利用原始质粒pSilent-1、pCambia1301及perg-22基因的EST序列,构建了该基因的沉默载体,成功转化了根癌农杆菌EHA105。通过农杆菌介导的木霉菌遗传转化体系,获得了哈茨木霉T88的转化子。实验中首次采用液体共培养法进行了木霉菌的诱导转化,并与常用的转膜培养法和复铺培养基法进行了转化效率的比较,发现液体共培养法的转化效率是后两者的5-10倍。Real Time PCR检测结果表明转化子中perg-22基因的表达量下降了99.3%,与能量代谢相关的多条基因表达量也都有不同程度(53%-90%)的下降,表明该基因与哈茨木霉T88的能量代谢有关。检测到转化子中麦角甾醇表达量下降了93.52%,说明该基因与哈茨木霉T88麦角甾醇的合成相关。这一结果,对研究真菌麦角甾醇的生产以及木霉菌菌剂的工业化有重大的意义。
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