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本论文主要利用酶工程技术,以渔业加工的下脚料鲨鱼皮和真鲷鱼鳞为原料,通过选择合适的蛋白酶和控制酶解过程,研究开发鱼胶原蛋白肽制品。 首先,分别以鲨鱼皮和真鲷鱼鳞为原料,以对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标,利用单因素实验优化菠萝蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶酶法制备胶原蛋白肽的最佳工艺条件,表明:在各自最适温度和最适pH条件下,三种酶酶解鲨鱼皮的最适酶量(酶与鲨鱼皮重量之比)都为0.2%,最适时间都为5h。三种酶酶解真鲷鱼鳞的最适酶量(酶与真鲷鱼鳞重量之比)除胰蛋白酶为0.1%,其他酶都为0.2%,最适时间都为5h。然后,制得在各种最佳条件下的胶原蛋白肽,把菠萝蛋白酶酶解鲨鱼皮所得肽标记为S1,胰蛋白酶酶解鲨鱼皮所得肽标记为S2,中性蛋白酶酶解鲨鱼皮所得肽标记为S3,菠萝蛋白酶酶解真鲷鱼鳞所得肽标记为Z1,胰蛋白酶酶解真鲷鱼鳞所得肽标记为Z2,中性蛋白酶酶解真鲷鱼鳞所得肽标记为Z3。测定它们对ACE的半抑制浓度(IC50),S1,S2,S3,Z1,Z2,Z3对ACE的IC50分别为4.8,8.4,8.2,6.5,12.0,7.2mg/ml。再把它们分别经SephadexG-25凝胶过滤柱层析进一步分离纯化,测定各个峰值部分的肽液对ACE的抑制效果,只有S1过G25的第一个峰值部分和Z1过G25的第二个峰值部分的肽液对ACE的抑制率超过50%。将这两个组分的肽液冷冻干燥,得到干品,分别标记为样品A和样品B,样品A和样品B对ACE的半抑制浓度分别为4.0mg/ml和2.2mg/ml。对ACE的抑制效果比过柱前分别提高了1.2和3倍。虽然样品B对ACE具有最好的抑制效果,但是它得率很低。如果要生产胶原蛋白肽保健品,S1是最合适的。 得到6种胶原蛋白肽干品之后,选取鲨鱼皮胶原蛋白肽中对ACE具有最佳抑制效果的肽S1及真鲷鱼鳞胶原蛋白肽中对ACE具有最佳抑制效果的肽Z1,对它们进行了基本成分的测定。结果显示,胶原蛋白肽中粗蛋白含量丰富,分别达到87.5%和86.3%,粗脂肪含量较少,分别为0.15%和0.12%,水分含量分别为11%和5.5%,灰分含量分别为1.0%和0.4%;胶原蛋白肽中对人体有益的金属元素含量丰富,S1中含量从高到低依次为K、Na、Ca、Fe、Cu、Zn,Z1中从高到低依次为Na、K、Ca、Fe、Cu、Zn,对人体有害的重金属含量都大大低于国家食品检验标准的安全剂量;氨基酸种类丰富,人体必需氨基酸分别为21.41%和13.35%,是质量较好的蛋白源;用此方法得到的胶原蛋白肽的分子量范围为2-3kDa容易为人体所吸收,同时也进一步验证了极佳的蛋白酶酶解效果。鲨鱼皮胶原蛋白肽吸湿率和保湿率分别为26.9%和123%,真鲷鱼鳞胶原蛋白肽吸湿率和保湿率分别为29.5%和117%,具有良好的吸湿和保湿性能,胶原蛋白肽对皮肤和头发有较大的亲和力,使其在化妆品开发方面有独特的应用价值。