猫泛白细胞减少症病毒属于食肉动物原细小病毒1型种,可引起猫科动物白细胞减少,发热、呕吐、腹泻等临床表现。该病在世界范围内广泛流行,我国多省市均发现FPLV流行,但关于FPLV分子生物学信息报道依然较少。此外有临床频见免疫失败的病例,不排除病毒的变异导致流行株发生碱基变化而产生的影响。因此,本研究为了解安徽合肥地区FPLV遗传进化情况,以及为FPLV建立一个新的检测方法,展开了一系列的研究。本研究首先从合肥市多家动物医院收集疑似FPLV病料,以Gen Bank中已经登录的FPLV标准株(登录号:M38246)为模板,进行FPLV鉴定和全基因组的引物设计。利用PCR、重组质粒构建等技术克隆出8株合肥地区FPLV全基因组序列,并通过Megalign等生物学信息软件对所得基因组序列进行遗传进化分析。此外,从Gen Bank中登录的10株FPLV节选出VP2基因,进行荧光定量引物设计,建立一个检测FPLV的SYBR GreenⅠPCR检测方法。与Gen Bank已发表的国内外参考毒株对比分析发现,全基因相似性为92.5%～99.2%。NS1基因在核苷酸和氨基酸存在不同程度的突变;VP2基因相似性为97.9%～99.7%,编码91位点的氨基酸由丙氨酸(Ala)全部突变为丝氨酸(Ser)。遗传进化树显示,合肥地区分离的FPLV全基因序列分析、VP2基因均呈独立分支进化,且VP2基因与疫苗株亲缘关系较远;NS1基因分析中AN-HF 02与MEV株属于同一分支,提示与MEV遗传距离较近。此外,建立FPLV SYBR GreenⅠPCR检测方法,最低可检8.4×10~1拷贝/μL。相关系数R~2=0.998,扩增效率Eff=95.4%,Tm值为83.0℃。重复性好,稳定性高,试验中能够特异的检出FPLV,适用于一线临床。综上所述,本研究较为系统的对安徽合肥地区FPLV的进行遗传进化分析,功能位点分析发现FPLV AN-HF 04株有6个氨基酸发生点突变,FPLV AN-HF 06株有1个氨基酸发生点突变,值得注意的是合肥8株FPLV VP2蛋白上第91位点均由A→S,提示合肥地区FPLV存在地域流行性,同时在不断进化。这一研究结果为其流行病学研究提供一定的参考,同时给基因工程疫苗研究提供了方向。此外,本研究还建立了FPLV荧光定量检测方法,为FPLV从预防到临床诊断等方面提供了一定帮助。