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目的:探讨免疫偶联物胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)-抗CD10偶联物(MDP-Antibody,MDP-Ab)对已接种卡介苗的健康儿童外周血中记忆性T淋巴细胞活化的影响。方法:1、采用Ficoll-Hypaque法分离获得健康儿童外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),10%胎牛血清的RPMI-1640培养液培养,分为3组:对照组(PBMC 1×106/m L+抗人CD28单克隆抗体0.5μg/m L)、MDP-Ab组(抗人CD28单克隆抗体+MDP-Ab 20μg/m L)、卡介苗(bacillus calmette-guerin,BCG)组(抗人CD28单克隆抗体+BCG 20μg/m L),光学显微镜下观察细胞生长情况及细胞形态;分别于0、12、24、48、72小时收集细胞上清液,ELISA方法检测上清液中干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)水平。2、采集健康儿童外周血与RPMI-1640培养液等体积稀释,分为4组:对照组、MDP-Ab组、BCG组及PHA组(抗人CD28单克隆抗体+PHA 20μg/m L),48小时后收集细胞,流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD4、CD45RA、CD69及胞内IFN-γ的表达。结果:1、细胞生长及细胞形态:与对照组相比,培养24小时后MDP-Ab组及BCG组细胞出现细胞聚集,细胞团中细胞形态可辨别。随培养时间延长细胞团的数量均增多,以BCG组最为明显。2、IFN-γ水平:对照组在0、12、24、48、72小时细胞上清液中IFN-γ水平分别为(401.76±17.10)pg/ml、(374.64±24.30)pg/ml、(376.53±28.96)pg/ml、(380.02±29.15)pg/ml、(390.17±33.64)pg/ml,MDP-Ab组在不同培养时间下细胞上清液中IFN-γ水平分别为(402.04±23.22)pg/ml、(421.49±24.09)pg/ml、(456.76±41.99)pg/ml、(479.81±21.43)pg/ml、(449.10±13.66)pg/ml。两因素重复测量资料的方差分析显示,MDP-Ab刺激后IFN-γ的水平明显高于对照组(F刺激=13.19,p=0.02),而培养时间对IFN-γ的水平无显著影响(F时间=1.65,p=0.21);处理因素与培养时间之间存在交互作用(F交互=3.51,p=0.03);对不同时间点两组间IFN-γ的水平进行t检验,MDP-Ab组IFN-γ水平在12h、24h、48h均显著高于对照组(p均<0.05)。BCG组在不同培养时间下细胞上清液中IFN-γ水平分别为(405.34±30.48)pg/ml、(404.98.70±37.08)pg/ml、(444.33±22.94)pg/ml、(502.20±15.52)pg/ml、(517.84±21.54)pg/ml,两因素重复测量资料的方差分析显示,BCG组IFN-γ的水平明显高于对照组(F刺激=5.49,p=0.00),且培养时间对IFN-γ水的水平有显著影响(F时间=26.60,p=0.00),处理因素与培养时间之间存在交互作用(F交互=5.49,p=0.00);对不同时间点两组间IFN-γ的水平进行t检验,BCG组IFN-γ水平在24h、48h、72h均显著高于对照组(p均<0.05)。3、记忆T淋巴细胞胞内IFN-γ表达情况:CD3+CD4+CD45RA-IFN-γ+细胞比例:对照组、MDP-Ab组、BCG组、PHA组分别为(0.010±0.017)%、(0.61±0.20)%、(1.05±0.45)%、(0.27±0.19)%。与对照组相比,MDP-Ab组的CD3+CD4+CD45RAIFN-γ+细胞比例明显升高(t=5.183,p=0.034),而BCG组及PHA组与对照组相比无统计学差异(p均>0.05)。各组表型为CD3+CD4-CD45RA-IFN-γ+的T淋巴细胞均很少甚至不表达。4、记忆T淋巴细胞表面CD69表达情况:⑴CD3+CD4+CD45RA-CD69+细胞比例:对照组、MDP-Ab组、BCG组、PHA组分别为(4.70±1.16)%、(8.99±2.75)%、(13.69±2.79)%、(8.44±3.25)%,MDP-Ab组及BCG组CD3+CD4+CD45RA-CD69+细胞比例均明显高于对照组(p均<0.05),而PHA组与对照组相比无统计学差异(t=1.938,p=0.179);⑵CD3+CD4-CD45RA-CD69+细胞比例:对照组、MDP-Ab组、BCG组、PHA组分别为(1.41±0.31)%、(3.91±1.73)%、(6.76±3.28)%、(5.15±1.79)%,MDP-Ab组及BCG组CD3+CD4-CD45RA-CD69+细胞比例均明显高于对照组(p均<0.05),而PHA组与对照组相比无统计学差异(t=3.601,p=0.067)。⑶CD3+CD4+CD45RA-CD69+与CD3+CD4-CD45RA-CD69+细胞比例比较:MDP-Ab、BCG两组CD3+CD4+CD45RA-CD69+细胞比例分别为(8.99±2.75)%、(13.69±2.79)%,而CD3+CD4-CD45RA-CD69+细胞比例为(3.91±1.73)%、(6.76±3,28)%,两组CD4+活化的记忆性T细胞比例均明显高于CD4-活化的记忆性T细胞比例(p均<0.05)。结论:MDP-Ab能够体外刺激已接种卡介苗的健康儿童记忆性T淋巴细胞分泌IFN-γ,诱导其表达早期活化标志CD69,提示MDP-Ab可以在体外诱导记忆T淋巴细胞的活化,且细胞活化在CD4+细胞中表现更为显著。这种活化效应和BCG刺激后发生的免疫反应相似。这为该偶联物应用于白血病的免疫治疗提供进一步的理论支持。