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真菌毒素是一类由真菌产生的次级代谢产物,对人和动物都有危害,具有致癌、致畸和致突变的作用。真菌毒素的检测方法有很多种,但存在成本高、检测时间长、试剂用量大、样品前处理繁琐等缺点。因此开发一种快速、简洁、低成本的富集净化真菌毒素的方法显得尤为重要。本文建立了一种基于反蛋白石光子晶体微球富集净化和检测赭曲霉毒素(OTA)、黄曲霉毒素Bi(AFBi)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的方法。首先利用微流控平台结合了自组装法制备出反蛋白石光子晶体微球,有着比较规则的结构和明显的光泽度。对制备反蛋白石光子晶体微球的方案进行了探索,得到了最佳制备方案为:PS浓度为10%(wt%),Si02浓度为18%(wt%),PS:Si02(v/v)=5:1。此方案制备出来的微球通过表征得出结果:微球表面光滑,孔径均一,排列整齐,内部结构无塌陷。对微球表面修饰上环氧基、醛基和羧基来连接抗体分子,并得出了最佳基团为醛基。基于反蛋白石光子晶体微球免疫亲和-高效液相色谱(HPLC)法富集净化O,TA、AFB1和DON三种真菌毒素。对几个条件进行优化,得出OTA的洗脱剂甲醇乙腈(1:1)混合溶液洗脱效率最好,洗脱剂体积为400μL,微球表面能结合的抗体浓度为60μg/mL,20μL的微球量能富集OTA最多达50ng,反蛋白石光子晶体微球作为载体富集效率能达到90%左右,而相同粒径大小的实心二氧化硅微球富集效率仅仅20%左右。在大米、小麦、玉米加标实验中的回收率分别为78.60±0.71～81.67±5.20%,75.00±31.92～89.17± 1.44%,71.60+3.70～84.58±2.60%。将上述方法运用到AFB1中得出结论:洗脱剂100%甲醇溶液洗脱效率最好,微球表面能结合的抗体浓度为60μg/mL,20μL的微球量能富集AFB1最多达40ng,反蛋白石光子晶体微球作为载体富集效率能达到90%左右,在大米、小麦、玉米加标实验中的回收率分别为 84.62+3.85～90.83±3.00%,70.51+2.22～87.70±0.89%,74.94±4.11～77.96± 2.79%。最后,DON是通过HPLC-DAD检测得出结论:洗脱剂最佳浓度为30%甲醇,微球表面能结合的抗体浓度为10Oμg/mL,20μL的微球量能富集DON最多达40ng,反蛋白石光子晶体微球作为载体富集效率能达到90%左右。在大米、小麦、玉米加标实验中的回收率分别为 68.09±1.72～69.20+2.40%,60.63±0.27～63.17+1.98%,56.19±1.26～63.49± 3.60%。综上,我们建立的以反蛋白石光子晶体微球免疫亲和-高效液相色谱(HPLC)法在OTA、AFB1、DON的富集、净化及HPLC检测中是可行的。证明了我们建立的这种方法在真菌毒素检测中具有普适性。