SGLT2抑制剂对棕榈酸诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制研究

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wori123ri123
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目的:本研究以棕榈酸(PA)处理大鼠H9c2心肌细胞建立脂毒性心肌损伤模型,并探讨钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂恩格列净(EMPA)及达格列净(DAPA)对PA诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:1.采用CCK-8法检测不同浓度PA对H9c2心肌细胞存活率的影响,选取PA最适浓度。将H9c2心肌细胞随机分为对照组、PA组(25μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1)处理24 h;2.采用CCK-8法检测不同浓度EMPA及DAPA对PA作用下H9c2心肌细胞存活率的影响,选取EMPA及DAPA的最适浓度。将H9c2心肌细胞随机分为对照组、PA组、PA+EMPA(0.1μmol·L-1、1μmol·L-1、10μmol·L-1)组、PA+DAPA(0.1μmol·L-1、1μmol·L-1、10μmol·L-1)组;3.采用流式细胞术及荧光显微镜半定量法检测不同浓度PA(100μmol·L-1、150μmol·L-1、200μmol·L-1)处理H9c2心肌细胞中活性氧(ROS)含量,筛选PA诱导ROS明显产生的最适浓度;4.采用流式细胞术及荧光显微镜半定量法检测EMPA及DAPA对PA作用下H9c2心肌细胞中ROS含量;5.将H9c2心肌细胞随机分为对照组、PA组、PA+EMPA(1、10μmol·L-1)组、PA+DAPA(1、10μmol·L-1)组、PA+LY294002组和PA+RAPA组并利用蛋白免疫印迹实验检测H9c2心肌细胞中TLR4、NF-κB、AKT及m TOR的蛋白表达并进行数据分析。结果:1.CCK-8实验结果显示:PA浓度为100μmol·L-1与200μmol·L-1时细胞存活率明显降低,与对照组比较具有显著性差异(P<0.01),选择PA 100μmol·L-1作为后续实验浓度;2.CCK-8实验结果显示:EMPA与DAPA在1μmol·L-1和10μmol·L-1时能够显著增加PA作用下H9c2心肌细胞存活率(P<0.01);3.ROS检测实验表明:PA 150μmol·L-1和200μmol·L-1处理H9c2心肌细胞12 h后可以明显诱导ROS的产生(P<0.01),采用PA 200μmol·L-1处理12 h进行后续ROS检测实验;4.预处理EMPA及DAPA对PA诱导的ROS产生有显著抑制作用(P<0.05或P<0.01),且DAPA效果更为显著(P<0.01);5.蛋白免疫印迹实验表明:预处理EMPA及DAPA均能下调由PA诱导的TLR4和磷酸化m TOR蛋白表达增加(P<0.01),增强磷酸化AKT的表达(P<0.01),但对磷酸化NF-κB p65蛋白表达无影响。预处理AKT抑制剂LY294002与m TOR抑制剂RAPA可以分别抑制磷酸化AKT与磷酸化m TOR蛋白的表达(P<0.01)。结论:EMPA及DAPA能够抑制ROS生成,且DAPA的作用更为显著,并通过下调TLR4及磷酸化m TOR蛋白表达,增加磷酸化AKT蛋白表达,从而保护PA诱导的心肌细胞损伤。这些实验结果表明EMPA及DAPA对脂毒性心肌损伤具有一定的保护作用,为脂毒性心肌病的治疗研究提供理论依据。
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