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沙门氏菌（Salmonella）是一类重要的人畜共患病原菌和食源性致病菌,不仅具有致病性,而且具有适应多种不同环境和多途径广泛传播的能力,严重危害养殖业发展和公众健康。近年来随着养鸭业集约化、规模化发展,沙门氏菌在鸭场中的流行性传播呈现多样性和复杂性。因此系统评估各养殖环节中沙门氏菌的污染状况,及各环节与鸭体内沙门氏菌感染来源的关联性,揭示鸭养殖过程中沙门氏菌散播的主要途径及污染控制关键点,是有效防控或减少鸭群感染沙门氏菌的重要前提。本研究采集鸭种蛋孵化到饲养不同阶段内鸭群及养殖环境中样本,进行鸭源沙门氏菌的分离鉴定,对不同来源及不同饲养时间点的分离菌株进行血清型和分子分型分析,阐明其在肉鸭养殖各环节的流行特征、传播规律,探究鸭群中沙门氏菌的感染来源;分离菌株进行雏鸭致病性试验,明确其致病性差异,了解体内感染的动态过程,为鸭源沙门氏菌防控和流行病学提供理论依据和数据支持。1.养殖链中鸭源沙门氏菌的污染状况和血清型分布规律本研究从山东省菏泽、聊城和河北省馆陶地区肉鸭场,采集鸭泄殖腔棉拭子、鸭场环境样本（粪便、水源、饲料、土壤及空气）及济宁、聊城2家孵化场健康鸭胚,样本总计736份。通过分离培养、双重PCR扩增和微生物质谱鉴定,共分离鉴定出160株沙门氏菌,总分离率为21.74%;养殖环节中沙门氏菌检出率由高到低依次为:鸭胚（40%）＞空气（35%）＞粪便（25%）＞鸭体（22.71%）＞饲料（17.46%）＞水源（13%）＞土壤（6.25%）。沙门氏菌在1日龄（44%）和15日龄（37.97%）雏鸭阳性率明显高于25日龄（4.42%～4.49%）,沙门氏菌感染情况有随鸭日龄增长而逐渐降低的趋势。160株沙门氏菌共分布有24种血清型,其中最流行的血清型为鼠伤寒沙门氏菌（S.Typhimurium）（30.15%）、科特布斯沙门氏菌（S.Kottbus）（13.97%）和肠炎沙门氏菌（S.Enteritidis）（10.29%）。优势血清型分布的规律性主要体现在,S.Typhimurium主要分布在鸭体和鸭胚中;S.Kottbus主要存在鸭体和养殖环境（粪便、水源、饲料和土壤）中;S.Enteritidis在鸭体、外环境（粪便、水源和饲料）和鸭胚均有分布;以上结果提示S.Typhimurium主要为垂直传播,S.Kottbus为水平传播,S.Enteritidis存在上述两种传播途径。从地域分布的角度分析,不同地域来源的沙门氏菌均有各自的优势血清型,表明沙门氏菌的流行具有一定的区域性。2.优势血清型沙门氏菌分离株的分子分型及溯源性分析41株S.Typhimurium和14株S.Enteritidis分离菌株运用成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）分型,结果显示,S.Typhimurium被分成了13种CRISPR型,S.Enteritidis被分成了3种CRISPR型,命名为TCT型和ECT型。S.Typhimurium的优势基因型为TCT3,主要来自鸭胚和鸭体,表明存在垂直传播可能,鸭胚是主要感染来源;胚中分离到的菌株TCT型最为丰富,各TCT型菌株亲缘关系为95.8%,充分体现出鸭胚源沙门氏菌菌株进化来源丰富但具有遗传稳定性,鸭胚成为不同来源菌株的基因储备库。S.Enteritidis以ECT1为优势CRISPR型,主要来自鸭体、环境（粪便、水源和饲料）和鸭胚,表明S.Enteritidis存在水平传播和垂直传播两种传播途径,其污染控制点遍布各养殖环节（环境因素和胚体）;且不同来源的S.Enteritidis亲缘关系在90%以上,表现出较高的遗传稳定性。19株S.Kottbus运用多位点序列分析（MLST）分型,共鉴定出4种ST型,优势ST型为ST1546,菌株全部分离自聊城场的鸭体及环境,表明该地区鸭场内沙门氏菌存在克隆传播;而ST198型菌株分离自不同地区的鸭体中,ST1690型菌株分离自不同地区粪便、饲料和土壤中,ST321型菌株分离自不同地区鸭体和饲料中。表明S.Kottbus存在同一地区和跨地区的不同来源菌株间的水平传播,环境因素是鸭群中S.Kottbus的重要来源。以上分子水平的溯源性分析结果与不同血清型菌株在养殖各环节的分布规律相一致。3.鸭源沙门氏菌的致病性试验将pFCc Gi荧光质粒用电转化的方式成功构建表达荧光蛋白的重组菌株S.Kottbus-pFCcGi和S.Enteritidis-pFCcGi。根据Reed-Muench法测得原始菌株S.Kottbus和S.Enteritidis的LD50分别为1.23×1010,8.77×10~5CFU/m L,重组菌株S.Kottbus-pFCcGi,S.Enteritidis-pFCcGi的LD50分别为1.71×1010,5.99×10~6CFU/m L,表明S.Enteritidis-pFCcGi的致病性高于S.Kottbus-pFCcGi,其结果与原始菌株S.Enteritidis和S.Kottbus的致病性差异相符合。并根据LD50的结果对雏鸭进行攻菌试验,在攻菌后的2、6、12、24、48和120 h分别采集心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、盲肠、胸腺及法氏囊组织制备石蜡切片,进行HE染色、免疫荧光及实时荧光定量PCR（q PCR）试验。结果显示:S.Enteritidis-pFCcGi组与S.Kottbus-pFCcGi组相比病程持续时间较长,病理组织学观察S.Enteritidis-pFCcGi组各组织脏器的炎症、出血、脂肪变性等病变程度高于S.Kottbus-pFCcGi组;根据免疫荧光和q PCR试验表明,两个试验组在感染2 h时均观察到细菌定植信号,且都以盲肠的定植量最高,在感染24 h左右沙门氏菌载量达到高峰,此时S.Enteritidis-pFCcGi组的细菌载量均高于S.Kottbus-pFCcGi组,120 h后两组均观察到定植菌体。