论文部分内容阅读
半胱氨酰白三烯（CysLTs）是中枢重要的炎症介质，CysLTs通过作用其受体(CysLT1R和CysLT2R)发挥效应。最近的研究发现，CysLT1R和CysLT2R调节脑缺血神经炎症。但是，CysLTR是否调节帕金森病（PD）相关的小胶质细胞炎症和氧化应激尚待研究。 本项目拟在小胶质细胞激活剂脂多糖（LPS）诱导的BV2小胶质细胞模型，研究CysLT1R和CysLT2R在LPS诱导的小胶质细胞炎症和氧化应激反应中的调节作用，并初步探讨其信号转导。旨在阐明CysLTR作为PD神经炎症治疗靶点的意义。 方法： 在小鼠小胶质细胞系BV2细胞培养，观察小胶质细胞激活剂LPS处理BV2细胞后前炎症细胞因子和氧化应激产物改变；进一步检测LPS诱导的BV2细胞CysLT1R，CysLT2R和ERK信号通路相关蛋白表达变化；在上述实验模型，评价CysLT1R拮抗剂montelukast，CysLT2R拮抗剂HAMI3379和ERK1/2抑制剂U0126对LPS诱导的小胶质细胞炎症和氧化应激的作用。 结果： 第一部分 CysLTR介导LPS诱导的小胶质细胞炎症和氧化应激 为阐明CysLT1R和CysLT2R是否参与小胶质细胞炎症和氧化应激反应，我们在BV2细胞培养观察了LPS诱导的改变。研究发现，LPS诱导BV2细胞前炎症细胞因子TNF-α和氧化应激产物iNOS、 NO以及ROS增加。LPS也浓度依赖性的诱导BV2小胶质细胞CysLT1R和CysLT2R表达上调。CysLT1R受体拮抗剂montelukast和CysLT2R选择性拮抗剂HAMI3379有效抑制LPS诱导的BV2细胞前炎症细胞因子和氧化应激产物。这些结果提示CysLTR在LPS诱导BV2小胶质细胞炎症和氧化应激反应中起关键作用。 第二部分 ERK1/2信号通路参与CysLTR介导的小胶质细胞炎症和氧化应激 为初步探讨 CysLTR参与 PD小胶质细胞激活的信号转导，在 LPS诱导的BV2细胞模型，我们观察了ERK1/2信号通路相关蛋白P-ERK和EGR-1的表达改变以及CysLT1R，CysLT2R拮抗剂和ERK1/2抑制剂的作用。研究表明，LPS诱导P-ERK和即早蛋白EGR-1表达上调。ERK1/2抑制剂U0126抑制LPS增加的P-ERK和EGR-1表达，减少LPS诱导的小胶质TNF-α、iNOS、 NO和ROS产物。CysLT1R拮抗剂montelukast和CysLT2R拮抗剂HAMI3379也抑制LPS诱导的P-ERK和EGR-1表达上调。结果提示ERK1/2信号通路参与CysLTR介导的小胶质细胞炎症和氧化应激反应。 结论： 1.在BV2小胶质细胞，CysLT1R和CysLT2R介导LPS诱导的小胶质细胞炎症和氧化应激，小胶质细胞因子TNF-α和氧化应激产物iNOS、 NO和ROS增加。LPS诱导ERK1/2磷酸化和EGR-1表达增加。 2. CysLT1R拮抗剂montelukast，CysLT2R拮抗剂HAMI3379和ERK1/2抑制剂U0126抑制LPS诱导的P-ERK和EGR-1表达及小胶质炎症和氧化应激反应。 3.本研究表明，CysLT1R和CysLT2R介导LPS诱导的小胶质细胞炎症和氧化应激反应，ERK1/2信号通路参与CysLTR介导的小胶质效应。