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柿叶为柿科植物柿(Diospyroskaki Thunb.)的干燥叶,主要分布于广西、河南、安徽、陕西、河北和浙江等省,柿叶收载于《中国药典》2015年版一部,作为传统中药,主要用于缺血性中风、心绞痛及内出血等;也可作为功能食品和化妆品,用于高血压、妇女保健等。研究报道柿叶具有抗氧化、神经保护、心血管保护、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗衰老、免疫提高和抗糖尿病等活性。到目前为止,文献报道从柿叶中已分离得到80余个化合物,包括黄酮类、萜类、多酚类,以及多糖类等。本文在综述了柿叶化学成分、药理活性、有效部位和质量控制研究的基础上,对其有效部位进行了系统的化学成分研究。干燥柿叶的95%和50%乙醇的渗滤提取物,分别用石油醚和乙酸乙酯萃取,其乙酸乙酯萃取物通过大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、开放ODS柱色谱及RP-HPLC等手段,分离得到46个化合物,通过理化常数测定、波谱数据分析等方法,鉴定了全部结构,包括环烯醚萜类化合物4个,木脂素类化合物8个,三萜类化合物19个,黄酮类化合物7个,芳香醇、醛、酸类化合物8个。其中,新化合物 9 个,分别为:persimmonoid A、B(1-2),persimmoninC、D、E、F、G、H、I(13-18;25)。已知化合物37个,分别为:女贞苷(3),橄榄苦苷(4),(+)-皮树脂醇(5),(+)-丁香脂素(6),(+)-松脂素(7),(+)-皮树脂醇苷(8),(+)-丁香脂素-β-D-葡萄糖苷(9),(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷(10),(+)-异落叶松脂素(11),(-)-(7’S,8S,8’R)-4,4’-dihydroxy-3,3’,5,5-tetramethoxy-7’,9-epoxylignan-9’-ol-7-one(12),kakisaponinA(19),kakisaponinB(20),2α,3α,19α,23-四羟基乌苏-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(21),ryobuni C(22),28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖委陵菜酸酯(23),rotungenic acid 28-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1 →2)-β-D-glucopyranoside(24),2α,3α,19α,24-四羟基齐墩果-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(26),2α,3α,19α,24-四羟基乌苏-12-烯-28-O-ββ-D-吡喃葡萄糖酯(27),niga-ichigoside F1(28),barbinervic acid(29),rotungenic acid(30),坡模醇酸(31),槲皮素(32),金丝桃苷(33),山奈酚(34),牡荆素(35),黄芪苷(36),三叶豆苷(37),杨梅素(38),对羟基苯乙醇(39),2-甲基苯甲酸(40),2,4-二羟基6-甲基苯乙酮(41),3-(4-羟基-3-甲氧基苯)丙烷-1,2-二醇(42),香草酸(43),原儿茶酸(44),原儿茶醛(45),羟基酪醇(46)。首次从柿叶中分离得到的化合物23个,分别为:化合物3-12,21-28,39-42,45-46。以总黄酮含量和浸膏得率为指标,采用正交试验设计优选柿叶醇提工艺,并考察其石油醚、乙酸乙酯的萃取工艺。同时,我们还考察了柿叶总三萜的提取工艺。最终确定醇提最佳工艺条件为加入10倍量70%乙醇,煎煮2次,每次2小时。石油醚脱色脱脂3次,乙酸乙酯萃取3次,得到柿叶总黄酮提取物(简称EAPL)。柿叶总黄酮和总三萜制备工艺合理、可行。采用HPLC-Q/TOF-MS联用技术定性分析了 EAPL的32个主要化学成分(14个黄酮,16个三萜,2个其它成分),并采用HPLC-QQQ-MS/MS方法对其中7个黄酮类成分进行了定量,结果发现各成分含量差异较大。为了探讨从柿叶中分离得到的12个化合物(4个环烯醚萜,8个木脂素)在抗氧化、神经保护方面的活性及其与结构和含量的关系,采用HPLC-QQQ-MS/MS联用技术对柿叶和柿果提取物中的这12个成分进行了含量测定,结果表明,柿叶与柿果所含7个化学成分相同,但在柿叶里含量高。采用3种方法(DPPH法、ABTS法和FRAP法)考察了这12个成分的抗氧化活性,采用过氧化氢诱导的人骨髓神经母细胞瘤细胞株损伤实验评价其中11个成分(3个环烯醚萜,8个木脂素)的神经保护作用。结果显示:化合物的结构与抗氧化活性有关联;另外,一些化合物显示出了显著的神经保护活性。本实验考察EAPL对Aβ25-35诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的保护作用以及对凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3影响,初步探讨了 EAPL预防和治疗老年痴呆(AD)的机理。结果表明,EAPL可以减轻Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,降低Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,提高Bcl-2蛋白的表达水平。结果表明:EAPL具有保护PC12细胞拮抗Aβ25-35的损伤作用;其抗AD的机理可能是由于其清除自由基而产生作用的。同时,我们还建立了Aβ1-42诱导大鼠老年痴呆(AD)模型,观察EAPL对AD大鼠认知功能的改善作用,并探讨其可能的作用机制。结果表明,EAPL对Aβ1-42诱导的老年痴呆有明显的保护作用;EAPL的抗AD作用与其抗氧化及抑制JNK/Caspase-3信号通路有关。