论文部分内容阅读
第一部分:川崎病患儿急性期血液与尿液中miRNA表达差异目的 了解川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿急性期血液及尿液中miRNA表达水平,比较两者之间miRNA组成、含量及表达水平差异,进一步验证尿液miRNA检测与川崎病诊断是否存在相关性。方法 选取在苏州大学附属儿童医院住院治疗的确诊典型川崎病患儿10例,同时期入院的其他发热性疾病患儿10例,收集临床资料,并留取病程急性期的外周血及尿液样本,使用高通量测序技术检测其血小板中miRNA表达及尿液中miRNA表达水平,比较两组间的差异。结果(1)通过高通量测序技术,发现KD患儿与其他发热疾病患儿相比,急性期血小板中差异表达的miRNA共46个,其中10个明显上调超过1.5倍,11个明显下调。(2)川崎组与发热对照组外周血及尿液miRNA检测发现血小板中特有的miRNA有37个,占比20.4%,尿液中特有的miRNA有23个,占比12.7%,血小板与尿液共有的miRNA有121个,总体吻合度66.8%,接近70%。结论 尿液中miRNA的含量较血液中含量低,但尿液中提取的miRNA与血液中提取的RNA的片段大小分布基本一致,RNA的完整度也较好,外周血miRNA组成与尿液miRNA组成吻合度高,可以使用尿液miRNA进行川崎病预测。第二部分:尿液miRNA预测高热患儿罹患川崎病风险的研究目的 寻找川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿急性期尿液中特异性表达的miRNA,作为生物标志物,构建高热患儿罹患川崎病风险的预测模型。方法 选取苏州大学附属儿童医院住院治疗的确诊为典型川崎病患儿10例,同时期入院的确诊其他发热性疾病患儿10例,分别留取急性期外周血及尿液标本,用于尿液中特异性miRNA(生物标记物)寻找。另外再选取同时期入院的典型KD患儿10例和其他发热性疾病8例,留取急性期尿液样本,作为尿液特异性miRNA(生物标记物)用于辅助诊断川崎病模型的验证。通过高通量测序技术检测出尿液中特异性表达的 miRNA,使用线性支持向量机(Linear support vectormachine,Linear SVM)学习分析模型,对检测出的miRNA根据其在区分川崎病患儿和发热对照组患儿中的重要性进行排序,以排名前两位miRNA作为尿液生物标记物,构建模型,以另外选取的18例样本对其进行验证。结果(1)川崎组与其它发热疾病对照组在尿液中显著差异表达的miRNA共计1 2 个,其中 hsa-miR-223-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR-99b-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-320a、hsa-miR-182-5p在川崎病急性期尿液中显著上调(P<0.05,FDR<0.05),而 hsa-let-7g-5p、hsa-let-7i-5p、hsa-miR-199b-3p、hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-25-3p在川崎病急性期尿液中显著下调(P<0.05,FDR<0.05)。(2)通过Linear SVM机器学习分析模型排序得到重要性最高的前两位为hsa-miR-223-3p和hsa-let-7g-5p。使用miR-223-3p和hsa-let-7g-5p的表达量对18例样本进行了判断验证,绘制ROC曲线发现只用这两个miRNA作为训练特征,AUC可达到0.96,特异性91%,敏感度97%。结论 川崎病急性期尿液中显著差异表达的miRNA共12个,其中miR-223-3p在川崎病急性期尿液中显著上调,而hsa-let-7g-5p呈显著下调,这两个miRNA在区分川崎病患儿和发热对照组患儿中最具有辅助诊断价值,可作为川崎病早期诊断的尿液生物标志物之一。