SARS-CoV-2 NP、RBD及其与FlaB融合蛋白的免疫原性比较研究

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SARS-Co V-2引发的COVID-19疫情在全球持续流行,疫苗研发和推广使用是阻止新冠疫情的关键手段。SARS-Co V-2核衣壳蛋白(NP)作为病毒的主要结构蛋白,是疫苗开发的潜在候选靶点;而冠状病毒受体结合结构域(RBD)能诱导产生病毒中和抗体,是SARS-Co V-2疫苗开发的主要候选靶点,且针对RBD的特异性抗体此前已被证明可防止SARS-Co V和MERS-Co V的感染。在疫苗开发中,抗原常与免疫佐剂联用以增强免疫原性,常用的免疫佐剂有脂多糖(LPS)和幽门螺旋杆菌鞭毛素(Fla B)。本研究通过评价NP、NP-Fla B、RBD、RBD-Fla B、RBD+LPS等不同组合的蛋白的免疫原性,筛选出SARS-Co V-2疫苗的最佳候选组合。重组蛋白经大肠杆菌表达系统和杆状病毒表达系统表达;纯化后经皮下或鼻内途径免疫BALB/c小鼠;分析血清中特异性Ig G、粘膜中特异性Ig A和特异性细胞因子分泌的T细胞应答。结果表明:一次皮下免疫NP或NP-Fla B足以引起抗NP的血清Ig G抗体反应;鼻内途径免疫下,NP-Fla B免疫组血清中NP特异性I g G抗体滴度和肺内粘膜Ig A抗体滴度显著高于NP组。RBD、RBD+LPS均能引起抗RBD的血清Ig G抗体反应且能有效中和SARS-Co V-2假病毒的感染,均显著高于RBDFla B组,NP、NP-Fla B、RBD、RBD-Fla B、RBD+LPS组都能有效诱导分泌IL-4的特异性效应T细胞进行体液免疫应答。整体结果表明,SARS-Co V-2 NP、RBD联合免疫佐剂均可高效诱导针对SARSCo V-2的特异性抗体,显示出作为SARS-Co V-2候选疫苗的潜力。LPS和Fla B在不同免疫方式下能增强免疫原性,LPS可以提高免疫血清的抗体效价及其对SARS-Co V-2的中和活性,Fla B可以增强黏膜免疫应答。所有组合都能有效诱导分泌IL-4的特异性效应T细胞促进体液免疫。本研究为基于SARS-Co V-2的NP、RBD不同免疫途径的新型疫苗的开发提供了初步数据,有助于拓展疫苗研究新思路。
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