论文部分内容阅读
芦荟(Aloe vera)属于多年生百合科常绿草本植物,主产于热带和亚热带地区。芦荟含糖类、蒽醌类物质等多种生物活性成分,具有抗菌、抗紫外线辐射、抗病毒、抗氧化、提高人体免疫机能等功能,并对肿瘤细胞和艾滋病病毒有抑制作用。目前对于芦荟应用的研究主要集中在保健品、药品、化妆品等行业,而在畜牧业方面的应用少有报导。抗生素自20世纪90年代初在我国畜禽业得到了广泛应用,但随之而来的药物残留等问题,严重制约我国畜产品的出口。研发抗生素替代品等天然绿色的生物制剂成为畜禽业研究的方向之一。芦荟作为药用植物,来源广泛、价格低廉、功能多样、无毒副作用,其多种生物学成分与抗生素相比具有潜在的应用价值,值得深入研究。鉴于前人相关的研究,本研究针对引致畜禽疫病的几种重要细菌和病毒,研究库拉索芦荟粗提物的抑菌、抗病毒效果,为开发天然绿色生物制品提供试验依据;同时选择芦荟多糖对家禽免疫禽波氏杆菌疫苗后的免疫增强作用为研究的切入点,选取由SPF胚孵化的健康雏鸡为动物模型,研究芦荟多糖的免疫增强作用,为开发新型免疫增强剂及家禽疫苗佐剂提供试验依据。本研究共分为以下两个部分:第一部分芦荟粗提物抑菌抗病毒作用的研究为了研究芦荟粗提物对多种常见畜禽致病菌和病毒的体外抑菌和抗病毒作用,采用培养基打孔法,观察芦荟粗提物对致病菌的抑菌作用;用含不同浓度芦荟粗提物的固体培养基观察抑菌效果;采用细菌计数法,分析致病菌在芦荟粗提物液体培养基中的增殖情况。分别采用细胞培养和鸡胚接种法,检测不同浓度芦荟粗提物以及不同作用时间对传染性囊病病毒(IBDV)和新城疫病毒(NDV)增殖的抑制作用。结果表明:芦荟粗提物对供试菌均具有抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌、四联球菌、八叠球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、蜡样芽胞杆菌有明显的抑菌圈,直径(D)>14 mm;芦荟粗提物浓度大于40 %即可使固体培养基中形成可数的菌落;浓度大于80 %的液体培养基中细菌生长到达对数期的时间比对照组延长至少4 h。IBDV与芦荟粗提物作用组的OD570nm值均高于病毒对照组,并且随浓度的增大和时间的延长而升高;NDV与芦荟粗提物作用组的血凝价均低于病毒对照组,并且随浓度的增大和作用时间的延长而降低。第二部分芦荟多糖提取及其对禽波氏杆菌灭活苗的免疫增强作用用优化的水提醇沉法提取芦荟多糖,用细菌灭活苗的常规制备方法制备禽波氏杆菌灭活苗。取5日龄SPF雏鸡210只,随机分为6组,I、II、III、IV、V组分别于颈部皮下注射含有芦荟多糖40 mg/ml、20 mg/ml、10 mg/ml、蜂胶20 mg/ml、松花粉多糖20 mg/ml的禽波氏杆菌疫苗,VI组只注射禽波氏杆菌疫苗,注射剂量均为1ml/羽份。免疫后每周采取血液、脾脏和小肠,用微量凝集试验检测血清抗体水平、间接ELISA法检测胆汁内抗体含量、全自动血细胞分析仪测定外周血淋巴细胞比率、流式细胞术检测脾脏淋巴细胞转化率。结果表明芦荟多糖得率为0.72%,纯度为82.4%。I、IV、V组血清和胆汁抗体水平、血液淋巴细胞比率以及脾脏淋巴细胞转化率均显著高于VI组(P<0.05),免疫后14~28d内,I、IV组与VI组相比差异极显著(P<0.01);I、IV、V组彼此差异不显著,均显著高于II、III组(P<0.05)。