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嗜吞噬细胞无浆体（Anaplasma phagocytophilum）为媒介蜱传播的专性胞内寄生的无浆体,属人兽共患病原。其遍布世界各地,宿主谱广泛,能引起以发热、食欲不振、迟钝和产奶量减少等临床症状,是一种具有重要公共卫生学意义的新兴病原体。伴随嗜吞噬细胞无浆体的遗传多样性研究,基于16S r RNA基因位点的不同分离株被鉴定。然而不同嗜吞噬细胞无浆体分离株间的相互关系及致病机制、在我国动物中的流行分布情况尚不明确。本研究调查了我国9个省区山羊、绵羊、牛、犬及硬蜱中不同嗜吞噬细胞无浆体分离株的感染情况,并在此基础上对主要流行分离株A.phagocytophilum-like1进行了体外培养及对其感染的HL-60细胞差异表达蛋白分析,为评估A.phagocytophilum-like1的公共卫生风险、嗜吞噬细胞无浆体与其宿主间相互作用、研究抗菌治疗或阻断致病途径的新靶点及人畜无浆体病防控提供了理论依据。为查明嗜吞噬细胞无浆体及相关分离株在我国不同宿主动物中的流行情况,采用基于嗜吞噬细胞无浆体16S r RNA基因位点PCR,结合限制性片段长度多态性（RFLP）方法对1338份羊血液DNA（山羊1031份、绵羊307份）、286份牛血液DNA、261份犬血液DNA及从部分省份采集山羊体表长角血蜱共751个,分为277个蜱池的硬蜱DNA进行嗜吞噬细胞无浆体及相关分离株感染情况调查及种系发育分析,为验证基于16S r RNA基因位点的分型结果,基于该病原gro EL基因位点对阳性样本进行检测并进行进化分析。结果显示,羊血液DNA样本中嗜吞噬细胞无浆体及分离株总阳性率为23.39%（313/1338）,其中山羊和绵羊的阳性率分别为27.64%（285/1031）和9.12%（28/307）,长角血蜱的阳性率为3.97%（11/277）;牛血液DNA样本的嗜吞噬细胞无浆体及分离株的总阳性率为11.53%（33/286）;犬血液DNA样本中共检测到8个阳性样本（3.01%）。经Xcm I、Bsa I两种限制性内切酶进行分离株鉴定,结果在羊血液样本检测到A.phagocytophilum-like1和A.phagocytophilum-like2,阳性率分别为22.65%（303/1338）和0.75%（10/1338）,其中只在山羊中检测到A.phagocytophilum-like2,且在山羊和绵羊血液样本中均未发现混合感染现象,在长角血蜱中只检测到A.phagocytophilum-like1;在牛血液样本中共发现嗜吞噬细胞无浆体、A.phagocytophilum-like1和A.phagocytophilum-like2三种分离株,阳性率分别为2.80%（8/286）、11.53%（33/286）和3.14%（9/286）;且存在嗜吞噬细胞无浆体和A.phagocytophilum-like1,以及A.phagocytophilum-like1和A.phagocytophilum-like2混合感染现象,混合感染阳性率分别为2.80%（8/286）、3.14%（9/286）;8个犬阳性样本均为A.phagocytophilum-like1分离株,系统发育分析结果和酶切结果保持一致。基于gro EL基因进化分析表明,得到的序列分别位于A.phagocytophilum-like1和A.phagocytophilum-like2进化分枝中,未扩增到嗜吞噬细胞无浆体gro EL基因序列。该研究结果为嗜吞噬细胞无浆体的分子流行病学和遗传多样性提供了更多的理论数据。为观察A.phagocytophilum-like1的结合、入侵HL-60细胞及其在细胞内的发育过程,采集A.phagocytophilum-like1阳性山羊血液,通过分离羊嗜中性粒细胞并接种至HL-60细胞中进行病原培养,采用基于16S r RNA基因位点的PCR检测、姬姆萨染色、间接免疫荧光、透射电镜等方法对HL-60细胞内病原感染情况及形态进行观察,用q PCR方法监测A.phagocytophilum-like1在HL-60细胞内的增殖过程,以确定从感染的HL-60细胞中纯化病原的最佳时间点;利用电子显微镜监测HL-60细胞内A.phagocytophilum-like1的结合、入侵和细胞内的发育过程。结果显示,PCR检测HL-60细胞DNA样品为A.phagocytophilum-like1阳性,表明A.phagocytophilum-like1成功感染了HL-60细胞,姬姆萨染色、间接免疫荧光及透射电镜观察到A.phagocytophilum-like1包涵体;q PCR监测A.phagocytophilum-like1病原在HL-60细胞内的增殖过程,确定感染后13 d作为最佳分离、纯化病原的时间节点;透射电镜结果显示,感染后2 h存在病原颗粒黏附细胞表面;4 h和8 h观察到致密颗粒形态的病原向细胞膜内化且有一部分病原包涵体与细胞膜脱离;12 h观察到病原形成的包涵体腔变大与有些病原颗粒开始变大向网状细胞样形态转变;24 h发现病原发生了复制;36 h、48 h及72 h细胞内同时存在致密颗粒和网状细胞两种形态,说明36 h后发生了病原的再感染。本研究为A.phagocytophilum-like1的致病性研究及有效防控奠定了理论基础。本研究利用4D非标记蛋白组学法对感染A.phagocytophilum-like1后12 h和48 h的HL-60细胞与未感染的HL-60细胞蛋白质组进行比较分析。差异蛋白表达变化阈值设为1.5倍时,结果显示,在感染A.phagocytophilum-like1 12 h时,HL-60细胞差异表达的蛋白有86个,其中上调和下调蛋白分别为22和64个;感染A.phagocytophilum-like1 48 h时,HL-60细胞有123个差异蛋白,其中上调和下调蛋白分别为64和59个。与感染后12 h相比,在感染后48 h的HL-60细胞内有178个差异表达蛋白,上调65个,下调113个。采用PRM技术验证了差异蛋白表达结果。对差异表达蛋白进行功能分析,结果显示感染后12h的HL-60细胞上调蛋白主要参与细胞凋亡、受体介导的内吞作用、自噬、蛋白质和脂质的转运,下调蛋白主要参与细胞骨架成分、细胞黏附和细胞表面通路等;感染后48 h,宿主细胞上调蛋白主要参与脂肪酸生物合成及代谢、脂质生物合成及代谢、氨基酸生物合成等过程,下调了细胞凋亡、免疫反应等过程的有关蛋白。与感染后12 h差异蛋白相比,48 h时上调了有关细胞骨架、细胞黏附、趋化性及防御反应等蛋白,下调了有关凋亡的蛋白。该结果可望为病原与宿主细胞互作及入侵机制研究提供帮助。