【摘 要】
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目的:本实验旨在研究平滑肌细胞表型转化对心肌细胞缝隙连接的影响。方法:1.提取大鼠原代肺静脉血管平滑肌细胞（SMC）,TGF-β1（1ng/ml,干预24小时）诱导平滑肌细胞表型转化,RT-q PCR法检测collagen I、vimentin、calponin、micro RNA 27b的表达;2.分别建立Transwell直接接触式及非接触式共培养体系,将HL-1小鼠心肌细胞分别与收缩型或分泌
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目的:本实验旨在研究平滑肌细胞表型转化对心肌细胞缝隙连接的影响。方法:1.提取大鼠原代肺静脉血管平滑肌细胞（SMC）,TGF-β1（1ng/ml,干预24小时）诱导平滑肌细胞表型转化,RT-q PCR法检测collagen I、vimentin、calponin、micro RNA 27b的表达;2.分别建立Transwell直接接触式及非接触式共培养体系,将HL-1小鼠心肌细胞分别与收缩型或分泌型SMC共培养,分为HL-1细胞单独培养组（HL-1组）、与收缩型SMC共培养的HL-1细胞（HL-1/SMC组）、与分泌型SMC共培养的HL-1细胞（HL-1/SMCTGFβ1组）。18-α-GA（50μM,干预24小时）用于抑制SMC缝隙连接功能。Western blot方法检测各组HL-1细胞中Cx43、Cx45、Cx40的表达,RT-q PCR法检测各组HL-1细胞中micro RNA 27b、ZFHX3m RNA的表达;3.分别提取收缩型SMCs或分泌型SMCs的培养基培养HL-1细胞,提取三组HL-1细胞蛋白和RNA,Western blot方法检测各组HL-1细胞中Cx43、Cx45、Cx40表达,RT-q PCR法检测各组HL-1大鼠心肌细胞中micro RNA 27b表达;4.用Lucifer Yellow Biocytin荧光染料预先加载至收缩型血管平滑肌细胞或分泌型血管平滑肌细胞,将HL-1细胞与Lucifer Yellow Biocytin加载后的收缩型或分泌型SMC共培养,观察迁移至HL-1细胞的Lucifer Yellow Biocytin的荧光强度。结果:1.提取的大鼠原代肺静脉SMC,α-SMA表达呈阳性;2.TGF-β1干预SMC后,SMC中collagen I、vimentin表达升高,calponin表达降低（p<0.05）;3.在直接接触式共培养模型中,HL-1组、HL-1/SMC组、HL-1/SMCTGFβ1组中,Cx43在HL-1/SMCTGFβ1组中表达最高,HL-1/SMC组其次,HL-1组中表达最低（p<0.05）4.在非接触式共培养模型中,HL-1组、HL-1/SMC组、HL-1/SMCTGFβ1组中HL-1细胞的Cx43、Cx45、Cx40表达无明显差异;5.与HL-1组比较,HL-1/SMC组或HL-1/SMCTGFβ1组的培养基对HL-1细胞的Cx43、Cx45、Cx40表达无明显差异;6.在与预先加载Lucifer Yellow Biocytin染料的收缩型或分泌型SMC共培养48小时后,与分泌型SMC共培养的HL-1细胞中Lucifer Yellow Biocytin荧光信号明显增强,在与使用18-α-GA干预后的分泌型SMC共培养的HL-1细胞中荧光信号明显减弱（p<0.05）;7.与收缩型SMC比较,分泌型SMC中micro RNA 27b的表达明显增高（p<0.05）,在直接接触式共培养模型中HL-1/SMCTGFβ1组中HL-1细胞中micro RNA 27b表达较HL-1组明显增高（p<0.05）,而与HL-1组比较,收缩或分泌型SMC培养基培养的HL-1细胞及非接触式共培养模型HL-1细胞中micro RNA 27b表达无明显变化;8.与HL-1/SMC组比较,micro RNA 27b的靶基因ZFHX3在与分泌型SMC共培养的HL-1细胞中表达明显下调（p<0.05）;当抑制分泌型SMC缝隙连接功能后,与其共培养的HL-1细胞中的ZFHX3表达恢复（p<0.05）。结论:HL-1细胞能与表型转化的平滑肌细胞建立功能性缝隙连接;表型转化后的平滑肌细胞中micro RNA 27b增高,可能通过缝隙连接介导转移至HL-1细胞内,调节HL-1中的缝隙连接蛋白表达,并与micro RNA27b的靶基因ZFHX3的表达有关。
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