猪/牛IgG Fc片段单克隆抗体的制备及初步应用

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在研制免疫胶体金试纸条快速方法时,我们发现用多克隆抗体作为金标示踪物,很难消除试纸条反应中的非特异性反应,如果改用抗IgG Fc单克隆抗体,则可解决此问题。由此,本室成功研制了检测鸡源抗体的试纸条方法。但猪、牛抗体检测试纸条的研制亦需要相应的抗IgG Fc片段单克隆抗体。因此,本实验采用常规的单克隆抗体的制备方法,制备了分泌抗猪/牛IgG Fc片段的McAb杂交瘤细胞株,现将主要结果报告如下。  将猪血清、牛血清经过饱和硫酸铵粗提,再经过G-200纯化得到猪IgG、牛IgG蛋白作为免疫抗原,加弗氏佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,经抗体效价测定,取血清在1:12800倍稀释时其OD450值接近1.0的免疫小鼠进行加强免疫,3d后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0在融合剂聚乙二醇(PEG,MW1450)作用下融合,经有限稀释法克隆和亚克隆,建立了3株抗猪IgG Fc的McAb的杂交瘤细胞株,2株抗牛IgG Fc的McAb的杂交瘤细胞株3C3和1D4,对得到的杂交瘤细胞株进行腹水效价测定、染色体数目分析、免疫球蛋白亚类、特异性及亲和力的测定方法进行鉴定。结果表明,3株(4F9,4G9和2A7)抗猪IgG Fc的细胞株小鼠腹水效价为1.0×106,亚类类型为IgG1,染色体数目为80~100条,非竞争ELISA法测定它们与猪 IgG的亲和力,2A7的亲和力最高。2株(3C3和1D4)抗牛IgG Fc的细胞株小鼠腹水效价为1.28×106,亚类类型为IgG1,染色体数目为80~100条,非竞争ELISA法测定它们与牛IgG的亲和力,3C3的亲和力最高。将抗猪IgG Fc单克隆抗体制成酶标抗体,代替市售试剂盒中的兔抗猪酶标抗体进行常规的ELISA检测时,二者结果基本一致,说明本实验所制备的单克隆抗体可用于后续的快速检测试剂盒的研究中。
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