【摘 要】
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目的:胰岛素样生长因子结合蛋白7（Insulin-like growth factor binding protein 7,IGFBP7）,是具有多种生物学功能的分泌蛋白。目前,许多研究表明IGFBP7能通过抑制增殖、诱导细胞凋亡或衰老而发挥抑癌作用,并可抑制肿瘤血管生成。RNA编辑（RNA editing）是一种广泛存在的转录后修饰机制,人类中最常见的RNA编辑类型是由腺苷脱氨酶（adenosi
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（32070790）； 辽宁省优秀青年科学基金项目（2020-YQ-07）； 辽宁省“兴辽英才计划”项目（XLYC1807223）； 沈阳市中青年科技创新人才支持计划项目（RC190158）； 辽宁省“百千万人才工程”资助项
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目的:胰岛素样生长因子结合蛋白7（Insulin-like growth factor binding protein 7,IGFBP7）,是具有多种生物学功能的分泌蛋白。目前,许多研究表明IGFBP7能通过抑制增殖、诱导细胞凋亡或衰老而发挥抑癌作用,并可抑制肿瘤血管生成。RNA编辑（RNA editing）是一种广泛存在的转录后修饰机制,人类中最常见的RNA编辑类型是由腺苷脱氨酶（adenosine deaminases acting on RNA,ADAR）家族催化的从腺苷到肌苷（A to I）的转变。IGFBP7是被ADAR家族成员ADAR2编辑的基因之一,在肺腺癌中,IGFBP7被编辑的水平高达10%,但目前编辑型IGFBP7在肺腺癌肿瘤细胞里发挥的作用及相关机制尚不明确。因此,本文拟通过体内外实验来阐明编辑型IGFBP7对肺腺癌的生物调节。研究方法:1、利用Western blot检测肺腺癌细胞系中IGFBP7的蛋白表达水平。2、构建稳定转染的H1975对照组、IGFBP7野生型组和IGFBP7编辑型组的肺腺癌细胞系。3、利用Western blot检测稳转细胞系和培养上清中IGFBP7的蛋白表达水平和含量。4、采用CCK-8、平板克隆形成和流式检测编辑型IGFBP7对H1975增殖和周期的影响。5、采用Transwell实验和划痕实验（Wound healing）检测编辑型IGFBP7对H1975迁移能力的影响。6、采用化疗药紫杉醇（Paclitaxel）处理各组细胞,Western blot检测cleaved-Caspase3、cleaved-PARP的表达水平。7、利用裸鼠移植瘤动物模型,皮下接种3×106个H1975细胞,成瘤后每两天测量一次肿瘤体积。8、采用Micro-CT扫描检测肿瘤内血管分布情况。9、提取H1975对照组、IGFBP7野生型组和编辑型组细胞的条件培养基（conditional medium,CM）,对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行培养。10、采用CCK-8检测各组CM对HUVEC增殖的影响。11、采用Transwell实验和划痕实验检测各组CM对HUVEC迁移能力的影响。12、利用成管实验（tube formation）,比较各组CM对HUVEC成管能力的影响。13、利用裸鼠移植瘤模型,皮下混合接种3×106个H1975各组细胞和6×105个HUVEC细胞,成瘤后每两天测量一次肿瘤体积。14、采用Micro-CT扫描检测肿瘤内血管分布情况。15、ELISA检测各组CM中PEDF和VEGF-A的含量。结果:1、编辑型IGFBP7促进H1975的增殖。2、编辑型IGFBP7促进H1975迁移。3、编辑型IGFBP7降低H1975对紫杉醇的敏感性。4、编辑型IGFBP7组的裸鼠移植瘤体积及瘤内血管密度大于野生组。5、编辑型IGFBP7组的条件培养基促进HUVEC的增殖、迁移和血管形成。6、IGFBP7编辑型H1975与HUVEC共同接种的移植瘤体积大于野生共移植组且高于单独接种组。7、编辑型IGFBP7共接种组的移植瘤血管密度大于野生共移植组。8、编辑型IGFBP7组肿瘤细胞分泌更高水平的VEGF-A和更低水平的PEDF。结论:RNA编辑型IGFBP7能增加H1975的增殖、迁移能力,降低H1975对紫杉醇的敏感性,促进血管内皮细胞的迁移成管能力,可能是通过上调VEGF-A和抑制PEDF的表达来促进肿瘤血管生成。
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