MAE-DB细胞毒性及抗菌性能的实验研究

来源 :华北理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ZFsky260583
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目的加工合成季铵盐单体(甲基丙烯酰氧乙基)-正十二烷基-甲基溴化铵(2-methacryloxylethyldodecylmethyl ammonium bromide,MAE-DB),通过检测MAEDB的细胞毒性以及抗菌性能,为临床上提供更佳的根管冲洗剂、根管封药,为提高根管再治疗的成功率提供更好的技术支持。方法实验分为三个部分:1 MAE-DB的合成:以N-甲基二乙醇胺和一溴十二烷为原料获得中间反应产物后,加入甲基丙烯酰氯,反应生成所需实验药品MAEDB。用质谱仪检测其分子质量证明确为所需实验药品。2 MAE-DB对细胞增殖影响的检测:将MAE-DB溶于去离子水中配制为浓度5μg/m L、10μg/m L、15μg/m L、20μg/m L、25μg/m L、30μg/m L、35μg/m L、40μg/m L MAE-DB溶液,小鼠成纤维细细胞(mouse fibroblasts,L929)培养至第五代后,将配制好的MAE-DB溶液分别加入到已经贴壁的细胞培养液中,每组设置5个副孔,利用CCK-8检测方法,分别在加入药液后6h、12h、24h、48h后测定L929细胞的增殖率,探究MAE-DB的安全性,并进行统计学分析。3 MAE-DB的抗菌性实验:将上述实验组药液筛选出最佳抗菌浓度后,与临床常用的冲洗剂次氯酸钠(sodium hypochlorite,Na Cl O)、复方氯己定(compound chlorhexidine,CHX)、乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)做对比,加入到培养至48h的粪肠球菌、白色念珠菌生物膜中,继续培养24h后,采用MTT法检分别检测用药后粪肠球菌和白色念珠菌生物膜的活性,间接比较不同浓度MAE-DB溶液、次氯酸钠、复方氯己定、乙二胺四乙酸的抗菌性,并对实验结果进行统计学分析。对用药后的粪肠球菌、白色念珠菌进行活菌/死菌荧光染色,通过荧光显微镜观察红色荧光(死菌)与绿色荧光(活菌)的强弱,活菌与死菌重叠的位置呈淡黄色或橙色,对比各组颜色差异分析各组药液的抗菌性。结果1本实验采用门舒特金法合成法,用质谱法进行检测验证确为季铵盐单体MAE-DB。2相同时间点不同浓度实验组的MAE-DB溶液各与对照组之间吸光度值(optical density,OD)的比较无统计学意义(P>0.05)。随着时间的变化,各实验组OD值的比较具有统计学意义(P<0.05)。3对粪肠球菌、白色念珠菌生物膜的抑制作用:8组不同浓度MAE-DB溶液比较均有统计学意义(P<0.05),对粪肠球菌生物膜最佳浓度为30μg/m L MAE-DB溶液组,对白色念珠菌生物膜最佳浓度为35μg/m L MAE-DB溶液组。两组最佳浓度分别与3%Na Cl O、CHX组、17%EDTA组之间两两比较,有统计学意义(P<0.05),效果最佳为MAE-DB溶液组。结论1 MAE-DB溶液对L929细胞无毒性作用,可考虑作为新型冲洗剂的备选。2 MAE-DB溶液对粪肠球菌、白色念珠菌生物膜具有抑制作用,与临床常用冲洗剂3%次氯酸钠、复方氯己定相比作用更佳。图12幅;表14个;参145篇。
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