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目的: 苯二氮 类药物(Benzodiazepines,BZDs)是中枢神经系统抑制剂,属镇静催眠药。这类药品由于较易获得,滥用现象时有发生,且滥用可造成中毒。又由于其用量少、起效快,也常被犯罪分子利用作为麻醉抢劫或其他犯罪活动的工具,所以对其在人体内含量的分析检测具有重要意义。 地西泮(Diazepam,DZP)、氯硝西泮(Clonazepam,CZP)、硝西泮(Nitrazepam,NZP)、三唑仑(Triazolam,TRI)、阿普唑仑(Alprazolam,ALP)、艾司唑仑(Estazolam,EST)和咪达唑仑(Midazolam,MID)是临床上常用的七种 BZDs。体内的药物含量都很低,浓度一般在ng/mL~μg/mL 之间。分析体内 BZDs 的方法主要包括免疫法、光谱法、色谱法等。其中高效液相色谱(HPLC)法应用广泛,用此法分析体内BZDs,具有快速、分离效果好、准确度高的优点。现有的用 HPLC 法测定这类药物的报道研究多是对其中某一种或两、三种药物的测定,尚未见用 HPLC 梯度洗脱方法同时测定这七种 BZDs 的报道。 本文旨在建立专属性强、准确可靠、操作简便的 HPLC 方法,用UV 检测器使用梯度洗脱程序同时测定人血清和尿液中的七种 BZDs,重庆医科大学硕士研究生学位论文 4可快速鉴定是否服用 BZDs 以及服用的是哪一种 BZDs。方法: 用梯度洗脱的 RP-HPLC 同时分离测定血清和尿液标本中的七种BZDs,采用外标法定量。色谱条件 色谱柱:Kromasil C18(4.6×250mm i.d,5μm,天津特纳科学仪器有限公司);本研究使用两种流动相,流动相Ⅰ:甲醇(A 组分)-30mmoL· L-1NH4Ac 缓冲液(pH 5.6)(B 组分),梯度洗脱步骤:0~20min A 组分 55%,B 组分 45%,20~30minA 组分由 55%升至 85%,B 组分由 45%降至 15%,30min 后 A 组分 85%,B 组分 15%;流动相Ⅱ:乙腈-30mmoL·L-1NH4Ac 缓冲液(pH 5.6)(33:67);紫外检测波长:230nm,流速:1mL·min-1;柱温:室温;进样量:20μL。结果:结果显示,在血清和尿液样品中方法精密度(RSD)不大于 10%,回收率在 94%~110%间。在较宽的范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数均在 0.9992 以上。地西泮的最低检测限为 2ng·mL-1,硝西泮的最低检测限为 7ng·mL-1,艾司唑仑的最低检测限为5.5ng·mL-1,阿普唑仑的最低检测限为 6ng·mL-1,氯硝西泮、三唑仑和咪达唑仑的最低检测限均为 5ng·mL-1。